PENGARUH KOMPLEKSASI KATEKIN DENGAN β-SIKLODEKSTRIN
TERHADAP KELARUTAN DAN STABILITASNYA

Gressy Novita*); Henny Lucida dan Amri Bakhtiar**)
*) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru
**)Jurusan Farmasi FMIPA Universitas Andalas, Padang

ABSTRAK

Katekin merupakan senyawa fenolik yang diekstraksi dari beberapa tanaman, seperti dari gambir (Uncaria gambir (Hunter) Roxb.) yang termasuk famili Rubiaceae), dalam bentuk murni ±99% katekin telah dapat diisolasi. Katekin memiliki efek farmakologis yaitu untuk  pencegah kanker dan penyakit kardiovaskular, antiinflamasi, antibakteri, antioksidan dan untuk hepatitis akut sehingga sangat potensial untuk dikembangkan sebagai kandidat obat. β-siklodekstrin merupakan oligosakarida siklik yang dapat memerangkap molekul “guest” di dalam rongga hidrofobiknya sehingga terbentuk kompleks inklusi. Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat pengaruh kompleks inklusi  katekin dengan β-siklodekstrin terhadap kelarutan, penentuan konstanta kesetimbangan kompleks dan melihat pengaruh kompleksasi terhadap stabilitas katekin dalam larutan. 
Pemeriksaan katekin meliputi pemerian, kelarutan dan spektrum UV-Vis. Pembentukan kompleks inklusi katekin dengan β-siklodekstrin dengan berbagai konsentrasi, lalu konstanta kesetimbangan kompleksnya ditetapkan dengan metoda kelarutan. Kemudian uji stabilitas katekin dan kompleks katekin-β-siklodekstrin di dalam larutan dapar pH 6,9 dengan kekuatan ion 0,3, dioksidasi dengan gas oksigen murni di atas penangas air suhu 40ºC.
Hasil penelitian menunjukkan nilai kelarutan jenuh katekin dalam air adalah 0,9445 ± 0.11 mg/mL. Pembentukan kompleks dengan β-siklodekstrin memberikan kompleks 1:1 dengan nilai konstanta kesetimbangan kompleks 1888,495 M-1. Peningkatan kelarutan katekin adalah sebesar 1,6 kalinya. (kelarutan menjadi 1,575%)  berarti telah memenuhi syarat kelarutan untuk calon obat, walaupun belum optimal. Pengujian stabilitas menggunakan KCKT dengan fase gerak tetrahidrofuran-asetonitril-asam fosfat 0,2% (1,7:14,3:84 v/v/v), menunjukkan bahwa β-siklodekstrin dapat memperlambat penguraian katekin, tetapi metoda yang digunakan belum memenuhi stability indicating assay.
	Kata Kunci : Katekin, β-siklodekstrin, kompleksasi, stabilitas

PENDAHULUAN
Katekin merupakan komponen utama gambir (Uncaria gambir (Hunter) Roxb.) yang termasuk famili Rubiaceae, dalam bentuk murni ±99% katekin telah dapat diisolasi. Katekin sukar larut dalam air dingin dan larut dalam air panas (Anonim, 1983).
  Katekin memiliki berbagai efek farmakologis, seperti hepatitis akut, antidiare (Anonim, 1983), antioksidan, antitumor (Valcic et.al, 1996), untuk penyakit kardiovaskular, antiinflamasi, antibakteri (Dubey et.al, 1984).
Aspek-aspek preformulasi dari katekin perlu diketahui sebelum memformulasinya menjadi sediaan obat, agar diperoleh formulasi yang tepat. Sediaan harus cukup stabil dalam jangka waktu tertentu, dimana obat tidak boleh berubah menjadi bentuk yang tidak berkhasiat atau racun. Oleh karena itu dalam studi preformulasi data stabilitas senyawa harus ditetapkan. Pengetahuan mengenai mekanisme penguraian dan faktor-faktor yang menyebabkan penguraian akan menjadi dasar dalam memperkirakan stabilitas obat (Steward &  Tucker, 1985). 
Sebagian besar obat-obat mudah mengalami degradasi kimia terutama bila diformulasi sebagai suatu sediaan cair (Florence & Atwood, 1981). Degradasi kimia pada obat-obatan kebanyakan disebabkan karena terjadinya reaksi hidrolisis dan oksidasi (Lachman et.al, 1989; Martin et.al, 1993). Telah dilakukan beberapa penelitian tentang stabilitas katekin dari gambir sebelumnya. Pemeriksaan stabilitas katekin dalam larutan berbagai pH, menunjukkan bahwa katekin lebih mudah teroksidasi pada kondisi pH yang lebih basa dengan mengikuti kinetika reaksi orde satu.(Somisko, 2004; Lucida, 2006). Pemeriksaan terhadap pengaruh suhu dan pH terhadap stabilitas kimia larutan katekin menunjukkan bahwa katekin lebih banyak terurai pada suhu yang lebih tinggi (55°C), dan pH lebih basa (pH 8) (Suardi et.al, 2006).
Jika dilihat dari strukturnya, katekin merupakan flavonoid dengan banyak gugus hidroksi, maka diperkirakan gugus hidroksi pada cincin B dari struktur molekul ini akan menjadi faktor utama yang menyebabkan ketidakstabilan katekin terhadap oksidasi. Peristiwa oksidasi ini dipengaruhi oleh oksigen, pH  larutan, cahaya dan adanya bahan antioksidan (Connors, 1992).
Suatu sediaan yang tidak stabil dapat dilindungi dengan beberapa cara, salah satunya adalah dengan kompleks inklusi diantaranya dengan siklodekstrin. Siklodekstrin adalah suatu molekul yang terdiri dari unit-unit glukosa dalam cincin atau susunan siklis dengan ruang yang garis tengahnya 6–10A°. Pengompleksan suatu senyawa dengan siklodekstrin, membentuk kompleks inklusi, dapat meningkatkan kelarutan dan stabilitas senyawa tersebut (Challa et.al 2005). Survey literatur menunjukkan bahwa telah dilakukan penelitian tentang pemeriksaan karakterisasi kompleksasi katekin dengan β-siklodekstrin dan beberapa modifikasi siklodekstrin dengan menggunakan beberapa metode seperti NMR, mikrokalorimetri dan teknik model molekul. (Kriz, 1999; Jullian, 2007). Tetapi pengaruh pengompleksan tersebut terhadap sifat fisikokimia katekin belum dipublikasikan.
Berdasarkan hal di atas maka perlu dilakukan suatu penelitian tentang pengaruh kompleks inklusi katekin dengan β-siklodekstrin terhadap kelarutan dan stabilitas katekin.

Gambar 1. Rumus bangun katekin

METODOLOGI
Bahan dan Alat
	Katekin, β-siklodekstrin, aqua bidestilata, asam fosfat p.a, tetrahidrofuran p.a, asetonitril p.a, kalium dihidrogen fosfat p.a, dikalium hidrogen fosfat p.a, asam asetat p.a, natrium asetat p.a, NaCl p.a, gas oksigen murni.
Satu unit KCKT (Shimadzu®) yang terdiri dari pompa (LC-10AT VP Shimadzu®), detektor UV-Vis (SPD-10A VP Shimadzu®), sistem pengontrol (SCL-10A VP Shimadzu®), jarum suntik 100 µl dan loop 20 µl  (SGE Australia), kolom C-18 (CLC-ODS (M) Shimadzu®, panjang 25 cm), kertas saring milipore (Whatman®), timbangan digital (Denver Instrument®), pH meter E 520 (Metrohm Herisau®), beker glass, labu ukur, labu Erlenmeyer, gelas ukur, pipet gondok, tabung reaksi, corong biasa, spektrofotometer (UV-1601 Shimadzu®), vial,  penangas air (Haake F3 Fisons®).
Cara Kerja
Pemeriksaan Bahan Baku Katekin
Pemeriksaan bahan baku katekin meliputi:  kelarutan (di dalam air, etanol 96%, etil asetat), dan jarak lebur (Anonim, 1983; Sriwulan, 1997).
Penentuan pengaruh β-siklodekstrin terhadap kelarutan katekin
1.	Pembuatan kurva kalibrasi katekin
Larutan katekin dibuat dengan berbagai konsentrasi di dalam larutan dapar asetat pH 5,2 yaitu 0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06; 0,07 mg/mL. Lalu dilakukan pengukuran serapan masing-masing larutan tersebut pada panjang gelombang serapan maksimum. Kemudian dibuat kurva antara konsentrasi terhadap serapan. 
2.	Penentuan kelarutan katekin  dan kompleks katekin-β-siklodekstrin dalam dapar asetat pH 5,2.
Katekin ditimbang ± 150mg, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 100 ml yang berisi 30 ml larutan β-siklodekstrin di dalam dapar asetat pH 5,2 dengan konsentrasi β-siklodekstrin 0, 4x10-3, 8x10-3, 12x10-3, 16x10-3, dan 20x10-3 M. Erlenmeyer dimasukkan ke dalam shaker. Dikocok selama 24 jam sampai dicapai kesetimbangan. Sampel diambil dan disaring dengan kertas saring millipore 0,45 μm dan  diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-vis pada panjang gelombang serapan maksimum katekin. Dilakukan tiga kali pengulangan.
3.	Penentuan konstanta kesetimbangan kompleks katekin – β-siklodekstrin.
Konstanta kesetimbangan kompleks ditentukan dengan memplot konsentrasi katekin dan konsentrasi β-siklodekstrin. Kemudian dicari persamaan garisnya. Konstanta kesetimbangannya dihitung menggunakan persamaan :

K11 =          b	
	a(1-b)

	Ket :  	K11 	= konstanta kesetimbangan
		b 	= slope
		a	= intersep

Penentuan pengaruh β-siklodekstrin terhadap kestabilan katekin menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi

1.	Metoda analisis kuantitatif 
Kompleks katekin – β-siklodekstrin dianalisis dengan metoda analisis secara KCKT fase terbalik menggunakan fase gerak tetrahidrofuran-asetonitril-asam fosfat 0,2%  (1,7:14,3:84 v/v/v), kolom C-18. Laju alir diatur 1 mL/menit dengan panjang kolom 25 cm.
2.	Validasi metoda analisis (Ibrahim,  1997)
3.	Uji stabilitas kompleks katekin – β-siklodekstrin di dalam larutan dengan sistem terbuka.
a.	Uji penguraian katekin di dalam larutan dapar phosphat 0,2 M pH 6,9, kekuatan ion 0,3.
Larutan katekin dibuat dengan konsentrasi 8 x 10-4 M. Proses oksidasi dilakukan dengan alat bubble menggunakan gas oksigen murni pada suhu 40C. Pada waktu  t = 0 dipipet 1 mL. Larutan diinjeksikan sebanyak 100µl ke dalam sistem KCKT. Puncak katekin dideteksi pada panjang gelombang serapan maksimum katekin. Demikian pula sampel diambil setelah 1,5 dan 6 jam. 
b.	Uji penguraian kompleks katekin – β-siklodekstrin dalam larutan dapar phosphat 0,2 M pH 6,9 kekuatan ion 0,3.
Kompleks katekin-β-siklodekstrin (20x10-3M) yang dilarutkan dalam dapar phosphat 0,2 M pH 6,9 sehingga konsentrasinya 8 x 10-4M. Proses oksidasi dilakukan dengan alat bubble menggunakan gas oksigen murni pada suhu 40C. Pada waktu t = 0 dipipet 1 mL. Larutan diinjeksikan sebanyak 100 µL ke dalam sistem KCKT. Puncak katekin dideteksi pada panjang gelombang serapan maksimum katekin. Demikian pula sampel diambil setelah 1,5 dan 6 jam. 
4.	Analisis Data
Penguraian katekin hasil penelitian kinetika sebelumnya mengikuti reaksi orde satu (Somisko, 2004; Lucida, 2006), sehingga dalam penelitian ini orde reaksi tidak perlu ditentukan lagi. Dari data konsentrasi katekin yang tersisa dalam larutan sebelum dan setelah pembentukan kompleks dihitung nilai konstanta laju reaksi.

HASIL DAN DISKUSI
Pemeriksaan Kelarutan 
Penentuan panjang gelombang serapan maksimum katekin di dalam pelarut air dan dapar asetat menunjukkan panjang gelombang maksimum yang sama yaitu 279 nm, seperti pada gambar berikut ini :

Gambar 2.    Panjang gelombang serapan maksimum katekin dalam dapar asetat pH 5,2.

Katekin yang telah dikompleks dengan β-siklodekstrin memberikan panjang gelombang serapan maksimum yang sama dengan katekin yaitu 279 nm. β-siklodekstrin merupakan oligosakarida siklik yang terdiri dari 6-8 unit glukosa, tidak mempunyai gugus kromofor sehingga tidak memberikan serapan dengan spektrofotometer UV-Vis (Yuwono, 1999). Jadi serapan yang terbaca pada spektrofotometer adalah serapan katekin.
Dalam menetapkan kadar katekin yang terlarut dalam air digunakan kurva baku secara spektrofotometri pada panjang gelombang serapan maksimum. Dari kurva kalibrasi ini, diperoleh persamaan kurva kalibrasi yaitu y = 11,589x + 0,0035 dengan nilai r = 0,9999.

Gambar 3. Kurva kalibrasi katekin dalam pelarut air.
Hasil penentuan kelarutan katekin dalam air dapat dilihat pada Tabel 1 dan Gambar 4 berikut :
Tabel 1.  Kelarutan katekin dalam air
No	Serapan	Konsentrasi (mg/mL)	
Katekin 25 mg (Faktor pengenceran : 100)	
1	0,347	2,964	
2	0,349	2,981	
3	0,342	2,921	
Rata-rata	0,346	2,955	
Standar Deviasi (SD)	0,031111841	
Koefisien Variasi (KV)	1,05 %	
Katekin 50 mg (Faktor pengenceran : 100)	
1	0,573	4,914	
2	0,558	4,785	
3	0,564	4,836	
Rata-rata	0,565	4,845	
Standar Deviasi (SD)	0,065146557	
Koefisien Variasi (KV)	1,34 %	
Katekin 100 mg (Faktor pengenceran : 500)	
1	0,211	8,952	
2	0,206	8,737	
3	0,210	8,909	
Rata-rata	0,209	8,866	
Standar Deviasi (SD)	0,11414925	
Koefisien Variasi (KV)	1,29 %	

Gambar 4.  Kurva kelarutan katekin dalam berbagai rasio fasa katekin-air

Gambar di atas memperlihatkan peningkatan kelarutan katekin dengan meningkatnya rasio fasa obat – pelarut yang memberikan persamaan linear y = 0,7904x + 0,9445; r = 0,9998. Dari persamaan ini, setelah diekstrapolasikan kepada nilai x = 0, maka diperoleh nilai kelarutan katekin di dalam air 0,9445 ± 0,11 mg/mL. 
Untuk meningkatkan kelarutan katekin yang terbatas dalam media air, maka dapat dilakukan dengan metode pembentukan kompleks inklusi dengan senyawa β-siklodekstrin. Karena katekin adalah suatu senyawa asam lemah dengan nilai pKa 7,2 dan 10,2 (Lucida, 2006) maka pada nilai pH dua tingkat di bawah nilai pKa, senyawa paling banyak berada dalam bentuk molekul (tidak terion) (Wells, 1988). Pada percobaan pembentukan kompleks inklusi  katekin dengan β-siklodekstrin ini dilakukan dalam larutan dapar asetat pH 5,2. Untuk perhitungan kadar digunakan kurva kalibrasi katekin dalam larutan dapar asetat pH 5,2 secara spektrofotometri. Dari kurva kalibrasi ini, diperoleh persamaan regresi yaitu y = 10,37x + 0,0118 dengan nilai r = 0,9993.
Pengujian dilakukan dalam dapar asetat pH 5,2 (dua unit di bawah nilai pKa katekin yaitu 7,2), karena pada nilai ini katekin paling banyak berada dalam bentuk tidak terion berarti berada dalam bentuk yang paling tidak larut. Diharapkan pada kondisi ini diperoleh data peningkatan kelarutan katekin dalam bentuk molekul, sedangkan dalam bentuk terion dapat diramalkan kondisinya lebih baik, karena dalam bentuk terion, suatu asam lemah akan lebih mudah larut.  Dari pengujian hubungan yang linear diperoleh antara kadar β-siklodekstrin dengan kelarutan katekin dengan persamaan  y = 0,9857x + 0,0365; r = 0,9972. Semakin besar konsentrasi β-siklodekstrin maka semakin besar pula katekin yang terlarut.  Linearitas ini menunjukkan bahwa tipe kurva yang terjadi adalah tipe AL dimana mengindikasikan terbentuknya kompleks 1:1 antara katekin dengan β-siklodekstrin. Dari persamaan di atas, harga tetapan stabilitas kompleks katekin yang diperoleh adalah sebesar 1888,495 M-1. Menurut Szejtli (1997), nilai tetapan kompleks yang baik berada antara 100 – 10.000 M-1, karena jika nilainya lebih rendah maka keberadaan kompleks tidak stabil, sedangkan jika nilainya lebih tinggi maka dapat mengurangi bioavailabilitasnya, karena kompleks praktis tidak diserap.
Peningkatan kelarutan katekin melalui kompleks inklusi dengan  β-siklodekstrin pada konsentrasi β-siklodekstrin tertinggi 0,02 M adalah sebesar 1,6 kalinya. Jika dilihat dari kelarutan jenuhnya yaitu sebesar 0.9445  mg/mL, maka terjadi peningkatan kelarutan menjadi 1,575%. Menurut Wells (1988), jika kelarutan obat kecil dari 1% (10 mg/mL), maka senyawa tersebut akan memiliki masalah dalam hal absorpsi. Berdasarkan hal tersebut dapat dinyatakan bahwa    β-siklodekstrin tidak terlalu efektif digunakan dalam meningkatkan kelarutan katekin. Hal ini diduga karena kelarutan β-siklodekstrin yang terbatas dalam air (1,85 gram/100 mL), dibandingkan hidroksi propil β-siklodekstrin, kemampuannya untuk membantu kelarutan katekin menjadi tidak terlalu besar.

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0

0.005

0.01

0.015

0.02

0.025

Konsentrasi sikodekstrin (M)

Konsentrasi Katekin (M)

Gambar 5.  Diagram fasa kelarutan katekin - β-siklodekstrin
Pemeriksaan Stabilitas Katekin dan Kompleks Katekin–β-Siklodekstrin

Pemeriksaan stabilitas katekin dan kompleks katekin-β-siklodekstrin, dilakukan proses oksidasi dengan mengalirkan oksigen murni ke dalam larutan. Tujuannya adalah untuk memperoleh konsentrasi jenuh oksigen di dalam larutan sehingga berkurangnya kadar oksigen di dalam larutan tidak mempengaruhi laju reaksi (Connors et.al 1992). Untuk menghindari pengaruh cahaya digunakan wadah terlindung cahaya. Pengaruh ion logam terhadap reaksi oksidasi dikurangi dengan menggunakan aquabidestilata pada pembuatan larutan dapar. Kekuatan ion diatur sama dengan penambahan garam inert natrium klorida. Suhu diatur tetap 40ºC selama pengambilan contoh untuk studi kinetika
Penggunaan metode analisis dilakukan menggunakan KCKT dengan fase gerak tetrahidrofuran-asetonitril-asam fosfat 2% (1,7:14,3:84 v/v/v), kolom C-18 (Shim pack CLC-ODS). Laju alir diatur 1 mL/menit dengan panjang kolom 25 cm. Nilai koefisien variasi yang diperoleh pada uji presisi sebesar 1,08%, memenuhi persyaratan <2%, linieritas y = (2,6404. 109)x  + 7,7606. 104; r = 0,99973. Berdasarkan statistik uji t diperoleh nilai thitung = 74,52 > ttabel = 2,353 (df = 3, P = 0,05). Berarti ada korelasi bermakna antara respon analit dengan konsentrasi. Uji sensitifitas terhadap limit deteksi (LOD) diperoleh nilai 0,8013 x 10-4 M, dan limit kuantitasi (LOQ) adalah 2,671x10-4 M pada rentang 2x10-4 sampai 10x10-4M.
	Sebelum pengukuran sampel dilakukan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi, terlebih dahulu disuntikkan katekin standar yang berfungsi sebagai standar eksternal. Katekin dilarutkan dalam fase gerak sehingga diperoleh konsentrasi  8 x 10-4 M. Kemudian katekin sebagai sampel dilarutkan dalam larutan dapar fosfat 0,2 M pH 6,9 dengan kekuatan ion 0,3, sehingga diperoleh konsentrasi 8 x 10-4 M. Larutan tersebut dioksidasi dengan gas oksigen di atas penangas air dengan suhu diatur 40ºC. Pengambilan sampel dilakukan pada t = 0, 90, dan 360 menit. Perlakuan yang sama dilakukan terhadap katekin yang telah dikompleks dengan β-siklodekstrin 0,02 M, dimana pada konsentrasi ini β-siklodekstrin mempunyai kelarutan yang paling besar. 
Puncak kromatogram katekin sampel yang diambil pada t = 0 ; 90; 360 menit terlihat hampir sama, dalam arti tidak terjadi perubahan bentuk puncak. Tetapi terjadi pertambahan luas puncak setiap waktu pengambilan sampel.  Pertambahan luas puncak diduga disebabkan adanya puncak hasil urai katekin yang muncul pada waktu yang sama dengan katekin dan puncaknya tersembunyi di bawah puncak katekin, sehingga luas puncak bertambah besar (puncak bertambah tinggi). Hal ini disebabkan karena metoda analisis yang digunakan belum merupakan stability indicating assay.
Kromatogram yang dihasilkan dari pengujian katekin yang dikompleks dengan β-siklodekstrin muncul pada waktu retensi sekitar sembilan menit. Puncak yang muncul merupakan puncak katekin, walaupun katekin telah terinklusi di dalam rongga β-siklodekstrin karena β-siklodekstrin tidak terbaca oleh detektor UV pada KCKT. Berdasarkan data, diperoleh gambaran bahwa katekin yang terinklusi dengan β-siklodekstrin, pertambahan luas puncak jauh lebih kecil dibandingkan katekin saja. Sejalan dengan asumsi di atas bahwa penambahan luas puncak disebabkan karena hasil urai muncul di bawah puncak katekin, maka dengan pengompleksan hasil urai yang terbentuk lebih sedikit, ditandai dengan lebih kecilnya penambahan luas puncak. Tendensi ini menyatakan perlambatan pembentukan hasil uraian dengan pembentukan kompleks dengan β-siklodekstrin.

Tabel 2.  Luas puncak katekin dan kompleks katekin-β-siklodekstrin setelah dioksidasi dalam larutan dapar pH 6,9 dengan sistem terbuka

No	Waktu (menit)	Luas puncak katekin	Luas puncak kompleks 	
1	0	2619581	2534190	
2	90	3651151	2546459	
3	360	3768277	2655549	

Gambar 6.  Kurva luas puncak katekin dan  kompleks katekin-β-siklodekstrin setelah dioksidasi dalam larutan dapar pH 6,9 dengan sistem terbuka

Tabel 3.   Persentase pertambahan luas puncak katekin dan kompleks katekin-β-siklodekstrin setelah dioksidasi dalam larutan dapar pH 6,9 dengan sistem terbuka

No	Waktu (menit)	Pertambahan luas puncak katekin (%)	Pertambahan luas puncak kompleks (%)	
1	0	0	0	
2	90	39,38	0,48	
3	360	43,85	4,79	

Gambar 7.  Kurva persentase pertambahan luas puncak katekin dan kompleks katekin-β-siklodekstrin setelah dioksidasi dalam larutan dapar pH 6,9 dengan sistem terbuka
REFERENSI

Ainley, W & P. J. Weller. 1994. Handbook of Pharmaceutical Excipient, Second edition. The Pharmaceutical Press, London

Anonim, 1983, An Encyclopedia of Chemical and Drugs, 9th ed., The Merck Index, Merck & Co Inc, Pathway New Jersey.

Anonim, 1990, Reminngton’s Pharmaceutical Science, 18th ed., Mack Printing Company, Easton,  Pennsylvania.

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Ed IV., Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Departemen Kesehatan RI., Jakarta.

Bakhtiar, A., 1991, “Manfaat Tanaman Gambir”, Makalah Penataran Petani dan Pedagang Pengumpul Gambir di Kecamatan 50 Kota, 29-30 November 1991, Jurusan Farmasi FMIPA, UNAND, Padang.

Cartensen, J.T., 1990, Drug Stability Principles and Practice, Marcel Dekker Inc, New York and Bassel. 

Cartensen, J.T., 1996, Modern Pharmaceutical, 3rd ed., Marcel Dekkert Inc., New York.

Challa, R; Ahuja, A; Ali, J & Khar, R.K., 2005,“ Cyclodextrins in Drug Delivery : An Updated Review”, AAPS Pharm. Sci. Tech. 6 (2).

Chan. A.L; Ly. T & Tan, K.H.Y, 1997, “The Effect of Hydroxypropyl β-Cyclodextrin on the Reaction of Sulphamethoxazole with Glucose in Aqueous Solutions”, Prosiding : Australian Pharmaceutical Science Association (APSA).

Cohen, J.L  & Connors K.A, 1970, “Determination of a Complex Stability Constant by the Kinetic Technique”, Am.  J. Pharm. Edu. 34, 197-203.

Connors, K.A., G.L. Amidon & V.J. Stella., 1992, Stabilitas Kimiawi Sediaan Farmasi, Edisi II, terjemahan Didik Gunawan, IKIP Semarang Press, Semarang.

Frijlink, H.W, Eissens A. C, Schoonen, A.J.M & Lerk C.F, 1990, “The Effect of Cyclodextrins on Drugs Absorption”, Int. J. Pharm. 64, 195-205.

Florence, A.T. & Atwood, D., 1981, Physicochemical Principles of Pharmacy, The Macmillan Press, Pennsylvania.

Higuchi, T & K.A. Connors.. 1965, Phase Solubility Technique. Adv. Anal Chem. Instrum. Vol. 4 . p: 117-210.

Jullian., Carolina, Sebastian Miranda, Gerald Zapata-Torres, Fernando Mendizabal & Claudio Olea-Azar’ 2007, “Studies of inclusion complexes of natural and modified cyclodextrin with (+)cathechin by NMR and molecular modelling”, Bioorg. Med. Chem, 15, 3217-3224.

Kramer, P.A & Connors K.A, 1969, “Determination of a Complex Stability Constant by The Spectral Technique”,  Am. J. Pharm. Edu. 33, 193-198. 

Kriz Z, Koca J, Imberty A, Charlot A & Auzely-Velty R., 2003,  “Investigation of The Complexation of (+)-Catechin by beta-cyclodextrin by Combination of NMR, Microcalorymetry and Molecular Modelling Techniques”, Org. & Biomol. Chem. 1 , 2590 – 2595. 

Lachman, L., H.A. Lieberman & J.L. Kanig, 1989, Teori dan Praktek Industri Farmasi, terjemahan Siti Suyatmi, Edisi III, UI Press, Jakarta

Li. Chuan, Xiaofeng Meng, Bozena Winnik, Mao-Jung Lee, Hong Lu, Shuqun Sheng, Brian Buckley & Chung S. Yang, 2001, “Analysis of Urinary Metabolites of Cathechin by LC/ESI-MS” Chem. Res. Toxico. 14, 702-707.

Lucida, Henny, 2006, “Determination of The Ionization Constants and The Stability of Catechin from Gambir (Uncaria gambir (Hunter) Roxb)”, The Twelfth Asian Symposium on Medicinal Plants, Spices and Other Natural Products (ASOMPS XII), Padang.

Martin, A., J. Swarbrick, & A. Cammarata, 1993, Farmasi Fisik, Edisi III, terjemahan Yoshita, UI Press, Jakarta

Somisko, L., 2004, “Penguraian Kimia Katekin dari Gambir di dalam Larutan Berbagai pH dengan Sistem Terbuka”, Skripsi Sarjana Farmasi, Jurusan Farmasi FMIPA, Universitas Andalas, Padang. 

Stewart, P.J., & I.G. Tucker, 1985, “Prediction of Drug Stability: Hydrolysis”, Aust. J. Hosp. Pharm., 15(1):165.

Stewart, P.J., & I.G. Tucker, 1985,  “Prediction of Drug Stability: Oxidation and Photolytic Degradation”,  Aust. J. Hosp. Pharm., 15(2):111-117. 

Suardi Muslim, Zulharmita, Khohar, R., 2006, “The Influence of pH and Temperature on Stability of Catechin Isolated From Gambir (Uncaria gambir (Hunter) Roxb)”, The Twelfth Asian Symposium on Medicinal Plants, Spices and Other Natural Products (ASOMPS XII), Padang.

Szejtli, J., 1997, “Utilization of Cyclodextrins in Industrial Products and Processes”,  J. Mater. Chem. 7(4), 575-587.

Wells, J.I., 1988, Pharmaceutical Preformulation: The Physicochemical Properties of Drug Substance, Ellis Horword Limitted, Jhon, New York.