ARTIKEL
Judul		: Formulasi Tablet Kitosan dan Uji Daya Mukoadesifnya Sebagai 
Penutup Luka pada Tukak Lambung Tikus
Penulis		: Syaftriana Putri
Program Studi	: Pascasarjana Farmasi
BP		: 05213004
Alamat		: Jl. RA. Kartini No. 30 B Kota Pariaman

Formulation of  Chitosan Tablet and an Assay of  its Mucoadhesive Activities
to Heal Gastric Ulcer in Rats

ABSTRACT
By. Syaftriana Putri
(Under the guidance of Elfi Sahlan Ben and Henny Lucida)
Formulation of chitosan tablet and an assay of its mucoadhesive activities to heal gastric ulcer had been investigated. Chitosan tablets were fabricated by the direct compression method and its mucoadhesives force was examined by in vitro and in vivo assays. The tablets were evaluated for weight uniformity, thickness uniformity, diameter uniformity, hardness, friability and disintegration. The result of this investigation showed that chitosan has a good fluidity and compressibility for direct compression. The increasing the contact time of chitosan tablets with gastric mucosal will increase their adhesive force so, it can decrease the percentage of gastric mucosal lesions that induced with absolute ethanol as much 1 mL/200gBB in experimental rats (p<0,05). Chitosan tablets can reduce gastric mucosal lesions that its effectiveness with sucralfate tablets is not significantly  difference (p>0,05).

Key words: Chitosan, Direct Compression Method, Mucoadhesive, Gastric Ulcer

I.	PENDAHULUAN

Latar Belakang
Kitosan merupakan polisakarida alam yang mengandung kopolimer glukosamin dan N-asetil glukosamin yang diperoleh dari proses deasetilasi kitin yang berasal dari kulit Crustaceae, beberapa kelas serangga dan jamur. Kulit udang merupakan sumber yang kaya akan penghasil kitosan, lebih mudah didapatkan dan tersedia dalam jumlah yang banyak (Felt et.al, 1998; Khan, 2002).
Kitosan merupakan senyawa makromolekul berantai panjang yang bersifat non toksik, biokompatibilitas, mudah terbiodegradasi dan dimodifikasi secara kimia (Felt et.al, 1998). Penggunaan kitosan ditemukan secara luas sebagai zat tambahan dalam formulasi sediaan obat antara lain sebagai bahan pengisi dalam tablet cetak langsung, bahan pengikat dalam granulasi basah, bahan penghancur tablet yang efeknya hampir sama dengan selulosa mikrokristal dan sistem penghantaran obat untuk sediaan lepas lambat (Kas, 1997; Ravi Kumar, 2000). Kitosan juga menunjukkan kerja biomedis yaitu bekerja sebagai agen hemostatik, hipokolesterolemia, antimikroba, antasida dan mempercepat penutupan luka         (Felt et.al, 1998).
Tukak lambung merupakan penyakit yang disebabkan oleh ketidakseimbangan sekresi asam dan pepsin serta lemahnya pertahanan lapisan mukosa lambung, yang ditandai dengan adanya luka pada lapisan mukosa dan meluas sampai ke bawah epitel (Wilson & Lester, 1992). Faktor-faktor  penyebab tukak lambung antara lain: Helicobacter pylori, obat anti inflamasi non steroid, penyakit Zollinger-Ellison syndrome, alkohol dan stres (Ganiswara, 1995). 
Tukak lambung pada hewan percobaan dapat diinduksi dengan menggunakan etanol, HCl, aspirin, indometasin, reserpin atau stres (Naciye, 2000). Penginduksian tukak dengan etanol memperlihatkan beberapa penyimpangan metabolik dan morfologi pada mukosa lambung dari hewan percobaan sama seperti yang diteliti pada manusia yang mengalami tukak lambung (Hara & Okabe, 1985). Pemberian etanol menyebabkan luka yang memborok (ulcerative lesions) dan meningkatkan lipid peroksidasi pada mukosa lambung, yang berperan signifikan terhadap patogenesis luka pada mukosa  (Pihan et.al, 1987). Kerusakan akibat induksi etanol akan merangsang pembentukan reaksi hidroksi radikal yang tinggi, peroksidasi lipid dan menyebabkan kerusakan pada membran mukosa (Yoshikawa et.al, 1993). 
Bioadesif adalah suatu keadaan dimana dua buah permukaan disatukan oleh adanya energi permukaan yang dapat berupa energi valensi, energi ikatan atau keduanya atau dua material yang salah satunya bersifat biologis, menjadi bersatu untuk periode waktu yang cukup lama karena adanya forsa antarmuka. Dapat juga berarti sebagai kemampuan suatu bahan untuk melekat pada suatu jaringan biologi untuk periode waktu yang lama. Jika sasaran adhesif adalah suatu mukus yang melapisi jaringan, fenomena ini disebut mukoadesif (Ahuja et.al, 1997). 
Kitosan merupakan salah satu polimer yang mempunyai sifat mukoadesif alami (Snyman, 2003). Mekanisme kerja mukoadesif kitosan terjadi melalui interaksi ionik antara gugus amino kitosan yang bermuatan positif dengan muatan negatif asam sialat yang terdapat dalam mukus. Selain itu, polimer hidrofilik ini dapat melekat pada permukaan mukosa dengan cara menarik cairan dari lapisan gel mukus yang terdapat pada permukaan epitel. Mekanisme adhesi ini sangat sederhana dan dikenal dengan istilah adhesion by hydration (Felt et.al, 1998; Sakkinen, 2003). Kerja kitosan ini sama dengan salah satu obat anti tukak lambung yaitu sukralfat. Molekul sukralfat mengikat molekul protein dan mukosa lambung secara elektrostatis. Reaksi ini membentuk suatu komplek yang stabil, tidak larut dan terikat pada permukaan mukosa lambung sehingga dapat melindungi mukosa lambung dari kerusakan lebih lanjut (Dollery, 1991).
Berdasarkan pada sifat mukoadesifnya, kitosan diduga kuat bisa berperan sebagai anti tukak lambung. Karena itu dilakukan penelitian untuk mengamati pengaruh sifat mukoadesif tablet kitosan sebagai penutup luka pada tukak lambung dengan menggunakan tikus yang mengalami tukak lambung karena diinduksi dengan etanol absolut dan membandingkannya dengan tablet sukralfat.
 
Perumusan Masalah
Dari uraian latar belakang dapat dibuat rumusan masalah sebagai berikut:
1.	Apakah sifat mukoadesif kitosan dapat menutupi luka atau tukak pada lambung tikus yang telah diinduksi dengan etanol absolut?
2.	Seberapa besar pengaruh tablet kitosan dalam menutupi luka atau tukak pada lambung tikus dibandingkan dengan tablet sukralfat?

Hipotesis
Sifat mukoadesif kitosan dapat menutupi luka atau tukak pada lambung

Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah:
1.	Memformulasi dan mengevaluasi tablet kitosan yang dibuat dengan menggunakan metoda cetak langsung.
2.	Melihat pengaruh sifat mukoadesif tablet kitosan sebagai penutup luka atau tukak pada lambung tikus yang telah diinduksi dengan etanol absolut dibandingkan dengan tablet sukralfat.

Manfaat Penelitian
Manfaat yang diharapkan dari hasil penelitian ini adalah diperolehnya tablet kitosan sebagai alternatif  baru obat tukak lambung dari bahan alam.

II.	BAHAN DAN METODE

Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Formulasi Sediaan Tablet, Farmasi Fisika dan Farmakologi, Jurusan Farmasi-FMIPA, Universitas Andalas, Laboratorium Penelitian PT. Semen Padang dan PT. Nusantara Beta Farma, bulan Maret-Juni  2007.

Alat, Bahan dan Hewan Percobaan
Alat
Mesin cetak tablet (Manesty Machines LTD. Liverpool type B3B No. 8C 172), alat pengukur kekerasan tablet (Stoke-Monsato), alat pengukur kerenyahan tablet (Roche Friabilator), alat pengukur waktu hancur (Pharma Test-PTZ-E), spektrofotometer infra merah (FT-IR Perkin Elmer), jangka sorong, alat pengukur densiti mampat (Tap Volumeter), alat pengukur luas permukaan spesifik (Fisher Scientific Sub-Sieve Sizer Model 95), alat Enslin, alat Infrared Moisture Balance (Kett F-IB), foto mikroskop Trinoculer (Carton), alat uji daya mukoadesif in vitro, seperangkat alat bedah, jarum suntik oral, lumpang dan stamfer, kaca pembesar.
 
Bahan dan Hewan Percobaan 
Kitosan (PT. Araminta Sidhakarya), Aerosil®, tablet sukralfat (Ulsidex®), Na CMC, etanol absolut, eter, larutan formalin 0,5%, NaCl fisiologis, aquadest, kerosin, tikus putih betina (150-200 g), yang berumur 2-3 bulan.

Metode Penelitian
A. Pemeriksaan pendahuluan bahan baku
Pemeriksaan  pendahuluan bahan baku meliputi:
1.	Pemeriksaan kitosan, dilakukan berdasarkan parameter standar Protan Laboratories Inc., meliputi derajat deasetilasi, pemerian, kelarutan, susut pengeringan, sisa pemijaran dan pH (Manjang, 1993; Srijanto, 2001). 
Untuk karakterisasi kitosan dilakukan dengan:
a.	Pemeriksaan spektrum infra merah kitosan
b.	Penentuan derajat deasetilasi kitosan (Domszy, 1985; Khan, 2002)
Nilai derajat deasetilasi ditentukan dengan rumus:
     DD (%) = 100 - 
Keterangan:	(A1655)	= absorbansi pita serapan pada 1655 cm-1.
		(A3450)	= absorbansi pita serapan pada 3450 cm-1. 
		1,33	= nilai (A1655) / (A3450) untuk deasetilasi 100%.
2.	Pemeriksaan Aerosil® meliputi pemerian, kelarutan, susut pengeringan, sisa pemijaran dan pH (Wade, 1994).

B. Pemeriksaan sifat fisika partikel bahan baku 
	Pemeriksaan ini meliputi: densiti benar, densiti nyata, densiti mampat, faktor Hausner, kompresibilitas, pemeriksaan sudut angkat, penentuan luas permukaan spesifik dengan alat Fisher Sub-Sieve Sizer, distribusi ukuran partikel, daya penyerapan air, mikroskopik, kandungan air.
 
C. Formulasi tablet 
Kitosan (500 mg) dan Aerosil® (2 mg) ditimbang sesuai formula dengan perencanaan 150 tablet untuk masing-masing formula, setiap tablet mempunyai berat           502 mg. Kitosan dicampur dengan Aerosil® hingga homogen selama 5-10 menit dengan alat pencampur. Pencetakan tablet dilakukan dengan mesin pencetak tablet (Manesty Machines LTD. Liverpool type B3B No. 8C 172).

D.	Evaluasi tablet
 	Evaluasi tablet meliputi: keseragaman bobot tablet, keseragaman ukuran tablet, kekerasan tablet, kerenyahan tablet dan waktu hancur tablet.

E. Uji daya mukoadesif tablet kitosan
   -Uji daya mukoadesif  in vitro
Uji ini dilakukan dengan metoda Parodi yang dimodifikasi (Argawal, 1999).
Prosedur sebagai berikut:
1.	Tikus dianestesi dengan eter kemudian dikorbankan dengan cara dislokasi leher. Jaringan mukosa lambung dibuka sepanjang kurvatura mayor dan dicuci dengan NaCl fisiologis.
2.	Jaringan mukosa lambung dipotong berbentuk lempengan bundar (diameter 1,3 cm) dan ditempelkan dengan lem pada permukaan tempat jaringan (tissue holder).
3.	Dengan cara yang sama, tablet ditempelkan pada bagian tissue holder yang lain. Kemudian tissue holder yang telah ditempelkan dengan jaringan mukosa dan tablet diletakkan sehingga bersentuhan (berkontak) satu dengan yang lain, menggunakan tekanan yang konstan selama 5 menit.
4.	Tissue holder dengan jaringan mukosa lambung digantung pada standar besi dengan menggunakan kawat aluminium.
5.	Botol kosong (berat sebelumnya telah ditimbang) diikatkan pada bagian lain tissue holder dengan bantuan kawat aluminium.
6.	Setelah 5 menit, air ditambahkan ke dalam botol tersebut menggunakan peralatan infus iv dengan kecepatan 1 tetes/detik sampai tablet terlepas dari jaringan mukosa.
7.	Air yang terkumpul dalam botol ditimbang dan dinyatakan sebagai berat (g) yang diperlukan untuk pelepasan adhesi mukus dengan tablet.
8.	Pengujian dilakukan untuk waktu kontak 10, 15, 20 dan 30 menit (Chary, 2000). 

Gambar 1. 	Peralatan uji daya mukoadesif in vitro yang dimodifikasi (Argawal, 1999).

-Uji daya mukoadesif  in vivo
  Prosedur sebagai berikut:   
1.	Persiapan hewan percobaan
Hewan percobaan yang digunakan adalah tikus putih betina yang sehat dengan berat badan 150-200g, lebih kurang berumur 2-3 bulan. Sebelum penelitian dilakukan, tikus diaklimatisasi selama 7 hari. Hewan dinyatakan sehat apabila selisih berat badan sebelum dan sesudah diadaptasikan tidak lebih 10% dan secara visual menunjukkkan prilaku normal.
2.	Dosis dan pembuatan sediaan
Dosis kitosan atau sukralfat (obat pembanding) yang digunakan masing-masing adalah 18 mg/200gBB, yang telah dikonversikan dari dosis manusia dewasa dengan volume pemberian sediaan 1% dari berat badan hewan percobaan dalam mL. Sediaan uji dibuat dalam bentuk suspensi dengan Na CMC 1% b/v, dengan prosedur sebagai berikut:
b.	Larutan Na CMC 1% b/v
Na CMC sebanyak 1 g ditaburkan di atas air panas sebanyak 20 kalinya            (20 mL) dalam lumpang panas, dibiarkan mengembang selama 15 menit, kemudian digerus hingga menjadi massa yang homogen dan diencerkan dengan aquadest sampai 100 mL.
c.	Suspensi kitosan
Na CMC sebanyak 1 g ditaburkan di atas 20 mL air panas, dibiarkan selama         15 menit, kemudian digerus menjadi massa yang homogen. Selanjutnya, tablet kitosan yang telah digerus, ditimbang sesuai dengan dosis (18 mg/200gBB), dimasukkan ke dalam massa Na CMC dan digerus hingga homogen. Kemudian, ditambahkan aquadest sedikit demi sedikit sambil digerus homogen sampai  100 mL.
d.	Suspensi sukralfat
Na CMC sebanyak 1 g ditaburkan di atas 20 mL air panas, dibiarkan selama       15 menit, kemudian digerus menjadi massa yang homogen. Selanjutnya, tablet sukralfat yang telah digerus, ditimbang sesuai dengan dosis (18 mg/200gBB), dimasukkan ke dalam massa Na CMC dan digerus hingga homogen. Kemudian ditambahkan aquadest sedikit demi sedikit sambil digerus homogen sampai  100 mL.
3.	Perlakuan pada hewan percobaan
a.	Tikus dipuasakan selama 48 jam tapi tetap diberi minum.
b.	Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 4 kelompok yaitu:
-	Kelompok I (kontrol negatif), diberi larutan Na CMC 1%. 
-	Kelompok II (kontrol positif), diberi etanol absolut secara oral sebanyak        1 mL/200gBB sebagai penginduksi tukak. Kemudian setelah 4 jam, diberi larutan Na CMC 1%.
-	Kelompok  III (kitosan), diberi etanol absolut secara oral sebanyak                       1 mL/200gBB sebagai penginduksi tukak. Kemudian setelah 4 jam, diberi suspensi kitosan dosis 18 mg/200g BB.
-	Kelompok IV (sukralfat), diberi etanol absolut secara oral sebanyak                       1 mL/200gBB sebagai penginduksi tukak. Kemudian setelah 4 jam, diberi sukralfat dosis 18 mg/200gBB yang disuspensikan dengan Na CMC 1%.
c.	Masing-masing kelompok dibagi menjadi 4 sub-kelompok secara acak. Tiap-tiap sub-kelompok dikorbankan pada waktu 1, 12, 24 dan 48 jam setelah pemberian obat atau larutan Na CMC 1%.
4.	Pembedahan
Tikus dianestasi dengan eter kemudian dikorbankan dengan cara dislokasi leher, dibedah abdominalnya. Lambung dikeluarkan dan direndam dengan 10 mL larutan formalin 0,5% selama 10 menit. Mukosa lambung dibuka dengan membedah lambung sepanjang kurvatura mayor, dicuci dengan NaCl fisiologis, diletakkan pada permukaan datar dan difoto (Kaneko et.al, 1998).
5.	Pengamatan tukak lambung
Mukosa pada permukaan bagian dalam lambung diamati dengan menggunakan kaca pembesar. Kemudian dihitung jumlah tukak yang terbentuk dan diukur besar tukak, masing-masing tukak diberi skor (Wattimena, 1982), yaitu:
-	lambung normal				1
-	lambung kemerahan				1,5
-	tukak dengan diameter sampai 0,5 mm	2
-	tukak dengan diameter 0,5-1,5 mm		3
-	tukak dengan diameter 1,6-4 mm		4
-	tukak dengan diameter >4 mm		5
-	perforasi					6
Persentase tukak dapat dihitung dengan rumus:
% H = 
Keterangan:
% H	= persentase keparahan tukak
	= skor yang didapat dengan pemberian obat (kitosan atau sukralfat)
	= skor yang didapat tanpa pemberian obat (kontrol positif)
F.	Analisis Data
Data hasil uji daya mukoadesif in vivo dianalisis secara statistik dengan menggunakan metode analisis variansi (ANOVA) dua arah dan dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan.

III.	HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil
Hasil yang diperoleh dari penelitian yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1.	Pemeriksaan pendahuluan bahan  baku
	Pemeriksaan pendahuluan bahan baku kitosan tertera pada tabel dibawah ini: 
	Tabel 1. Hasil pemeriksaan pendahuluan bahan baku kitosan
No.	Identifikasi	Persyaratan (Manjang, 1993; Srijanto, 2001)	Pengamatan	
1.	Pemerian	Serbuk granul, warna putih hampir kuning, tidak berbau dan tidak berasa.	Memenuhi syarat	
2.	Kelarutan	Praktis tidak larut dalam air, sangat sukar larut dalam alkohol, larut dalam asam asetat.	Memenuhi syarat	
3.	Susut pengeringan	Tidak lebih dari 10%	5,35%	
4.	Sisa pemijaran	Tidak lebih dari 2%	1,72%	
5.	pH	7,0-9,0	8,2	
6.	Derajat deasetilasi	Lebih dari 70%	78,05%	

Pemeriksaan bahan baku pembantu Aerosil®   tertera pada tabel dibawah ini:
	Tabel 2. Hasil pemeriksaan pendahuluan bahan baku Aerosil®
No.	Identifikasi	Persyaratan (Wade &              Welley, 1994)	Pengamatan	
1.	Pemerian	Serbuk putih, ringan, tidak berbau dan tidak berasa.	Memenuhi syarat	
2.	Kelarutan	Praktis tidak larut dalam pelarut organik, air dan asam-asam.	Memenuhi syarat	
3.	Susut pengeringan	Tidak lebih dari 2,5%	2,04%	
4.	Sisa pemijaran	Tidak lebih dari 2,0%	1,54%	
5.	pH	3,5-4,4	4,1	

2.	Pemeriksaan sifat fisika partikel bahan baku
Hasil pemeriksaan sifat fisika partikel kitosan dapat dilihat pada Tabel 3. 
Tabel 3. Hasil pemeriksaan sifat fisika partikel kitosan
No.	Parameter	Kitosan	Persyaratan	
			Serbuk	Rujukan	
1.	Densiti benar (g/mL)	1,40 ± 0,0001			
2.	Densiti nyata (g/mL)	0,33 ± 0,0015			
3.	Densiti mampat (g/mL)	0,37			
4.	Faktor Hausner	1,12	<1,25	Aulton, 1988; Well, 1988	
5.	Kompresibilitas (%)	10,81	10-20	Lachman, 1994	
6.	Porositas (%)	76,50			
7.	Sudut angkat (°)	28,19 ± 0,0150	<25° (sangat baik), 25°-30° (baik), 30°-40° (kurang baik),  >40° (sangat jelek)	Voight, 1994;
Lachman, 1994	
8.	Diameter volume permukaan (µm)	23,00 ± 0,5000			
9.	Luas permukaan spesifik (cm2/g) 	1863,94±40,5280			
10.	Kandungan air (%)	4,33 ± 0,1400	3-5	Voight, 1994	
Hasil evaluasi kandungan air serbuk kitosan diperoleh 4,33%, sementara syarat yang ditetapkan antara 3-5% (Voight, 1994). Hal ini mengindikasikan bahwa serbuk kitosan memiliki kandungan air yang memenuhi persyaratan.
Hasil evaluasi daya penyerapan air seperti tertera pada Gambar 2. 

0

0.5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

4,5

5

0

10

20

30

40

50

60

70

Waktu (menit)

Jumlah air yang diserap (mL/g)

Gambar 2. Kurva daya penyerapan air partikel kitosan.
Hasil pengukuran frekuensi distribusi ukuran partikel dengan menggunakan mikroskop yang dilengkapi mikrometer dapat dilihat pada Gambar 3.

   0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Diameter partikel kitosan (um)

Frekuensi (%)

 25,005    75,015    125,025   175,035  225,045   275,055   325,065	

		      Gambar 3. Histogram frekuensi distribusi ukuran partikel kitosan.
3.	Evaluasi tablet
Hasil evaluasi tablet dapat dilihat pada Tabel 4, yang secara umum telah memenuhi persyaratan yang ditetapkan. 
	Tabel 4. Hasil evaluasi tablet kitosan
No.	Evaluasi	Tablet Kitosan	Persyaratan	
			Tablet	Rujukan	
1.	Keseragaman bobot (mg)	501,90 ± 0,0034	Bobot   rata-rata
>300 mg: tidak boleh >2 tablet mempunyai penyimpangan bobot >5% & tidak ada satu tabletpun mempunyai penyimpangan bobot >10%	Anonim, 1979	
2.	Diameter (mm)	12,18 ± 0,0034	Kecuali dinyatakan lain, garis tengah tablet tidak >3 kali & tidak <1⅓ kali tebal tablet	Anonim,
1979	
3.	Ketebalan (mm)	4,21 ± 0,0069			
4.	Kekerasan (kg/cm2)	6,17 ± 1,0400	4-8	Voight, 1994	
5.	Kerenyahan (%)	0,98	0,5-1	Lachman, 1994
(Voight, 1994: 0,8%)	
6.	Waktu hancur 	9,23 ± 0,7023	Tablet biasa tidak              >15 menit	Anonim,
1979	
4.	Uji daya mukoadesif in vitro
Hasil uji daya mukoadesif in vitro tablet kitosan dengan mukosa lambung tikus dalam berbagai variasi waktu kontak, diperlihatkan dalam Tabel 5 dan diagram batang pada Gambar 4.
	Tabel 5. Hasil uji daya mukoadesif in vitro
Waktu kontak (menit)	Daya adhesi (g)	
	Kitosan (n = 3)
(Rata-rata ± SD)	Sukralfat (n = 1)	
5	16,15 ± 5,61	17,42	
10	35,32 ± 6,70	37,23	
15	51,61 ± 7,43	53,12	
20	71,50 ± 5,65	70,89	
30	72,43 ± 5,70	74,21	
Dari Tabel 5 dan Gambar 4 dapat dilihat bahwa peningkatan waktu kontak akan meningkatkan daya yang diperlukan untuk melepaskan adhesi tablet kitosan dengan jaringan mukosa lambung sehingga semakin lama waktu kontak maka daya adhesi semakin besar.
                    
0

10

20

30

40

50

60

70

80

Daya adhesi (g)

5

10

15

20

30

Waktu kontak (menit)

tablet kitosan

tablet sukralfat

Gambar 4. 	Diagram batang hubungan waktu kontak (menit) tablet kitosan dan tablet sukralfat dengan daya adhesinya (g) pada mukosa lambung tikus.

5.	Uji daya mukoadesif in vivo
	Hasil uji daya mukoadesif in vivo diperlihatkan pada Tabel 6 dan Gambar 5. Pengolahan data log persentase tukak lambung secara Anova dua arah diketahui bahwa persentase tukak terhadap kelompok perlakuan (kontrol positif, kontrol negatif, kitosan dan sukralfat) dan waktu pengamatan (1, 12, 24 dan 48 jam) terdapat perbedaan yang sangat nyata (P<0,01) seperti yang terdapat dalam Tabel 7.

Tabel 6.  	Data log persentase tukak lambung tikus pada pengamatan 1, 12, 24 dan 48 jam setelah pemberian kitosan dan sukralfat sebagai pembanding dengan dosis masing-masing 18 mg/200gBB.
Kelompok Perlakuan	Replikasi
(n = 3)	Log persentase tukak lambung tikus pada waktu (jam) ke-	
		1	12	24	48	
Kelompok
 I
Kontrol positif	1	2	2	2	2	
	2	2	2	2	2	
	3	2	2	2	2	
	Rata-rata±SD	2 ± 0	2 ± 0	2 ± 0	2 ± 0	
	Rata-rata log persentase tukak lambung kelompok I : 2 ± 0	
Kelompok II
Kontrol negative	1	0,501	0,688	0,651	1,138	
	2	0,561	0,782	0,910	1,317	
	3	0,782	0,940	1,125	1,556	
	Rata-rata±SD	0,615±0,148	0,803±0,127	0,895±0,237	1,337±0,210	
	Rata-rata log persentase tukak lambung kelompok II : 0,913 ± 0,306	
Kelompok III
Kitosan	1	1,765	1,752	1,277	1,784	
	2	1,792	1,804	1,301	1,909	
	3	1,944	1,906	1,718	1,976	
	Rata-rata±SD	1,834±0,096	1,820±0,078	1,432±0,248	1,890±0,097	
	Rata-rata log persentase tukak lambung kelompok III : 1,744 ± 0,210	
Kelompok IV
Sukralfat	1	1,658	1,115	1,277	1,468	
	2	1,851	1,760	1,301	1,738	
	3	1,908	1,850	1,692	1,964	
	Rata-rata±SD	1,806±0,131	1,575±0,400	1,423±0,233	1,723 ± 0,248	
	Rata-rata log persentase tukak lambung kelompok IV : 1,632 ± 0,169	

Keterangan: SD = Standar Deviasi

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

2

1

12

24

48

Waktu (jam)

kontrol positif

kontrol negatif

kitosan

sukralfat

Log % tukak lambung

Gambar 5. 	Diagram batang hubungan waktu (jam) perlakuan terhadap log persentase rata-rata tukak lambung tikus.
	Tabel 7.	Hasil pengolahan data log persentase tukak lambung tikus dengan metoda general linear model anova dua arah.
Sumber Keragaman	DB	JK	KT	F	P	
Perlakuan
Waktu
Interaksi
Galat
Total	 3
 3
 9
32           
47	7,814
0,552
0,945
1,037
 10,348	2,605
0,184
0,105
0,032	80,345
  5,676
  3,238	0,0000**             0,0031**
0,0067**
	
Keterangan: 
**	= Berbeda sangat nyata
*	= Berbeda nyata
ns	= Tidak berbeda nyata
DB	= Derajat Bebas 	
JK	= Jumlah Kuadrat
KT	= Kuadrat Tengah
P	= Tingkat kepercayaan berbeda nyata

	Pada uji lanjut (Duncan) data log persentase tukak lambung terhadap perlakuan  antara kelompok kontrol positif dengan kelompok kontrol negatif terdapat perbedaan yang sangat nyata (P<0,01). Efek persentase tukak lambung kitosan terhadap kontrol positif terdapat perbedaan yang nyata (P<0,05) dan sukralfat terhadap kontrol positif sangat berbeda nyata (P<0,01), tetapi antara kelompok kitosan dengan sukralfat tidak terdapat perbedaan yang nyata (P>0,05). Uji lanjut persentase tukak lambung terhadap waktu pengamatan diperoleh adanya perbedaan yang nyata antara waktu pengamatan 24 jam dengan 48 jam (P<0,05). 

Pembahasan
Karakterisasi kitosan yang meliputi spektrum infra merah dan derajat deasetilasi. Pada spektrum infra merah kitosan terlihat adanya pita serapan O-H pada 3500-3100 cm-1, C-H pada 3000-2900 cm-1 dan C=O pada 1700-1600 cm-1. Perhitungan derajat deasetilasi kitosan berhubungan dengan pita serapan pada bilangan gelombang 1655 cm-1 dan 3450 cm-1. Serapan pada 1655 cm-1 merupakan pita serapan gugus karbonil N-asetil sedangkan serapan 3450 cm-1 merupakan pita serapan gugus hidroksi polisakarida. Derajat deasetilasi kitosan ditentukan dengan metoda baseline dan dihitung dengan persamaan Domszy dan Roberts (Domszy & Roberts, 1985; Khan, 2002). Derajat deasetilasi kitosan yang diperoleh adalah 78,05%. Hal ini memenuhi persyaratan kualitas kitosan karena lebih besar dari 70% (Ravi Kumar, 2000; Srijanto, 2001; Sakkinen, 2002). 
Tablet kitosan dibuat dengan metoda cetak langsung, karena dilihat dari pemeriksaan sifat fisika partikel bahan baku, serbuk kitosan memenuhi persyaratan untuk dicetak  dengan menggunakan metoda ini. Pemilihan metoda ini juga didukung oleh tujuan penggunaan tablet kitosan  sebagai obat tukak lambung yang diharapkan bekerja lokal pada saluran cerna (lambung) sehingga dengan metoda cetak langsung, tablet lebih cepat terdisintegrasi untuk melepaskan bahan aktif.       
Dari hasil uji daya mukoadesif in vitro yang dilakukan, diperoleh rata-rata selisih daya adhesi kitosan dengan mukosa lambung normal pada waktu kontak 5, 10, 15 dan 20 menit adalah 18,45 (g). Jika dibandingkan dengan daya adhesi tablet sukralfat dengan mukosa lambung, sifat mukoadhesif tablet kitosan tidak terlalu kuat dibandingkan dengan tablet sukralfat. Daya adhesi suatu polimer bioadesif dengan mukus sangat dipengaruhi oleh kondisi atau komposisi mukus yang ada pada sistem mukoadesif. Komposisi mukus bervariasi tergantung pada spesies, lokasi anatomis dan keadaan patofisiologi organisme (Ahuja et.al, 1997).  
Pada pengujian daya mukoadesif in vivo digunakan tikus sebagai hewan percobaan. Hal ini disebabkan karena tikus sangat mudah dipengaruhi oleh stres dan lingkungan. Dari hasil penelitian, tukak dapat terbentuk pada hewan percobaan yang diberi beban stres.  Pembentukan tukak lambung yang disebabkan oleh stres adalah melalui peningkatan asam akibat perangsangan vagus (Wilson & Lester, 1992). 
Etanol yang digunakan adalah etanol absolut sebanyak 1 mL/200gBB terbentuknya tukak lambung pada tikus dilihat pada tingkat keparahan yang berbeda-beda tergantung waktu pengamatan. Semakin lama waktu pengamatan, maka semakin besar keparahan tukak yang diperoleh. Hal ini dikarenakan lamanya interaksi etanol dalam lambung dan semakin meningkatnya asam lambung karena tikus tetap dipuasakan. Nilai persentase rata-rata keparahan tukak lambung tikus yang diperoleh untuk kontrol positif adalah 100%          (log 100 = 2).     
Dalam penelitian ini, tablet sukralfat digunakan sebagai obat pembanding untuk pengamatan efek mukoadesif in vivo tablet kitosan. Dosis sukralfat yang digunakan adalah 18 mg, diperoleh dari konversi dosis untuk manusia dewasa dengan berat badan 70 kg ke dosis tikus dengan berat badan 200 g. Dosis sukralfat yang efektif untuk tukak lambung adalah 1 g, 4 kali sehari dan faktor konversi dosis manusia ke dosis tikus adalah 0,018 (Laurence & Baqarach, 1964; Dollery, 1991).
Dosis kitosan yang digunakan berdasarkan pada dosis sukralfat yaitu 18 mg/200gBB. Pemberian kitosan secara oral pada pengamatan 1, 12, 24 dan 48 jam, dapat mengurangi keparahan tukak lambung yang sebelumnya diinduksi dengan pemberian etanol absolut, dengan nilai log persentase rata-rata tukak secara berturut-turut adalah 1,834; 1,820; 1,432 dan 1,890% terhadap kontrol positif (Tabel 6). Nilai ini menunjukkan bahwa terjadi penurunan persentase rata-rata tukak pada pengamatan 1, 12 dan 24 jam apabila dibandingkan dengan kontrol positif, sedangkan pada pengamatan 48 jam terjadi kenaikan persentase tukak lambung. Kenaikan yang sangat besar pada 48 jam pengamatan diduga disebabkan berkurangnya jumlah kitosan yang berikatan dengan lubang tukak sehingga efek kitosan sebagai penutup luka pada mukosa lambung berkurang, akibatnya memperparah tukak yang telah ada.
Pemberian sukralfat secara oral pada pengamatan 1, 12, 24 dan 48 jam, memperlihatkan penurunan persentase keparahan tukak dengan nilai log rata-rata secara berturut-turut adalah 1,806; 1,575; 1,423 dan 1,723% (Tabel 6). Sama halnya dengan kitosan, pada pengamatan 48 jam terjadi peningkatan persentase keparahan tukak. Hal ini diduga disebabkan karena berkurangnya atau makin sedikitnya jumlah sukralfat yang berikatan dengan mukosa lambung setelah 2 hari pemberian. Sukralfat dapat menempel ke tukak lambung dan tukak duodenum selama lebih dari 6 jam dan kurang dari 24 jam. Daya adhesi sukralfat pada mukosa lambung yang mengalami tukak lebih besar daripada mukosa lambung normal (Dollery, 1991). 
Mekanisme kerja sukralfat sebagai sitoproteksi lambung hampir mirip dengan kitosan. Pada suasana asam, obat ini membentuk gel kental yang secara selektif mengikat pada tukak yaitu berupa komplek yang stabil antara molekul obat dengan protein pada tukak. Komplek yang terbentuk ini tahan terhadap hidrolisis oleh pepsin dan berfungsi sebagai sawar yang melindungi tukak terhadap difusi asam, pepsin dan garam empedu (Dollery, 1991; Li et.al, 1993).
Berdasarkan perhitungan analisis variansi dua arah terhadap log persentase tukak pada mukosa lambung yang diinduksi dengan etanol absolut didapatkan perbedaan yang sangat nyata (P<0,01) pada kelompok perlakuan (kontrol positif, negatif, kitosan dan sukralfat) dan waktu (pengamatan pada 1, 12, 24 dan 48 jam) terhadap persentase keparahan tukak (Tabel 7). Untuk mengetahui perbedaan dari masing-masing perlakuan dan waktu pengamatan terhadap persentase keparahan tukak, dilanjutkan pengolahan data dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan.
Pada uji lanjut terhadap data log persentase tukak tiap perlakuan, didapatkan perbedaan yang sangat nyata antara kelompok tikus kontrol positif dengan kelompok kontrol negatif (P<0.01). Hal ini menunjukkan bahwa etanol absolut yang diberikan secara oral sebanyak 1 mL/200gBB pada kelompok kontrol positif dapat menyebabkan terjadinya tukak lambung secara bermakna. Pemberian kitosan dan sukralfat pada tikus yang telah diinduksi dengan etanol absolut, dapat mengurangi keparahan tukak secara bermakna dengan tingkat kepercayaan masing-masingnya adalah (P<0,05) dan (P<0,01) jika dibandingkan terhadap kontrol positif. Sedangkan kelompok kitosan dan sukralfat tidak memperlihatkan perbedaan yang nyata (P>0,05). Hal ini mengindikasikan bahwa efek kitosan terhadap penurunan persentase tukak lambung tidak berbeda nyata dengan efek sukralfat. Pada uji lanjut terhadap data log persentase tukak terhadap waktu pengamatan, didapatkan perbedaan yang nyata (P<0,05) antara pengamatan tukak pada waktu 24 jam dengan               48 jam. Sedangkan antara waktu pengamatan 1, 12 dan 48 jam, masing-masingnya tidak memperlihatkan perbedaan yang nyata. Hal ini mengindikasikan bahwa pada waktu 24 jam obat mencapai efektifitas penekanan tukak yang optimal dan pada waktu pengamatan              48 jam terjadi kenaikan persentase tukak yang tidak berbeda nyata dengan waktu pengamatan 1 dan 12 jam.
Efektifitas tablet kitosan dalam menekan keparahan tukak lambung tikus yang diperoleh secara analisis statistik dengan uji lanjut Duncan memperlihatkan perbedaan yang tidak signifikan dengan tablet sukralfat (P>0,05). Hal ini disebabkan karena pemberian dosis kitosan yang tidak tepat untuk menghasilkan efek penekanan tukak yang setara atau lebih baik dari sukralfat. Dalam penelitian ini, perhitungan dosis yang dilakukan untuk kitosan berdasarkan pada dosis efektif tukak lambung sukralfat yaitu            18 mg/200gBB. Untuk mendapatkan efektifitas kitosan yang setara dengan sukralfat, seharusnya diperhatikan perbandingan jumlah mol antara kedua bahan aktif ini. Kitosan mempunyai berat molekul berkisar antara 103 - 106 Dalton sedangkan berat molekul sukralfat adalah 2086,75 Dalton (Anonim, 1996; Sakkinen, 2003). Dengan menggunakan dosis yang sama akan diperoleh perbandingan jumlah mol sukralfat lebih besar daripada kitosan sehingga jumlah partikel sukralfat yang berikatan dengan mukus lambung lebih banyak daripada jumlah partikel kitosan. Karena itu, dibutuhkan dosis kitosan yang lebih besar dari 18 mg/200gBB agar memberikan efek yang setara dengan sukralfat.

          
IV.	KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa:
Kitosan mempunyai sifat alir dan kompresibilitas yang baik sehingga dapat dibuat menjadi tablet dengan menggunakan metoda cetak langsung. Peningkatan waktu kontak tablet kitosan dengan jaringan mukosa lambung akan meningkatkan daya adhesi kitosan dengan mukosa lambung sehingga dapat menurunkan persentase tukak pada lambung tikus yang diinduksi dengan etanol absolut sebanyak 1 mL/200gBB dengan perbedaan yang nyata (P<0,05). Tablet kitosan dapat mengurangi keparahan tukak lambung yang efektifitasnya tidak berbeda nyata dengan tablet sukralfat (P>0,05).

Saran
Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk mencari dosis kitosan yang tepat untuk memberikan efek yang setara atau lebih baik dari sukralfat.

DAFTAR PUSTAKA
Ahuja, A., R.K. Khar & J. Ali. 1997. Mucoadhesive Drug Delivery System. Drug  Dev. Ind. Pharm. 23 (5): 489-515.

Anonim. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi ketiga. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. hal: 6-8.

Anonim. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi keempat. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. hal: 4-6, 1086-1087.

Anonim. 1996. An Encyclopedia of Chemicals Drugs and Biologicals. Twelfth Edition. Merck and Co. Inc, New York. p: 9051.

Argawal, V. & B. Mishra. 1999. Design, Development, and Biopharmaceutical Properties of Buccoadhesive Compacts of Pentazocine. Drug Dev. Ind. Pharm. 25 (6): 701-709.

Aulton, M.E. 1988. Pharmacetics, The Science of Dosage Form Design. Churchill Livingstone, London. p: 304-320. 

Dollery, S.C. 1991. Therapeutic Drugs. Vol. II. Churchill Livingstone. p:107-110.

Domszy, J.G. & G.A.F. Roberts. 1985. Evaluation of Infrared Spectroscopic Techniques for Analyzing Chitosan. Makromol Chem.186:1671-677.

Felt, O. & Piere B. 1998. Chitosan: A Unique Polysacharide for Drug Delivery. Drug Dev. Ind. Pharm. 24 (11): 979-993. 

Fleming, M., S.J. Mihic & R.A. Harris. 2001. Ethanol, in Goodman and Gilman, The Pharmacological Basic of Therapeutics. 10th Ed. Mc Graw-Hill Medical Publishing Division, New York. p: 429-442.

Ganiswara, G. 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi keempat. Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran UI, Jakarta. hal: 501-508.

Hara, N. & S. Okabe. 1985.  Effects of Gefarnate on Acute Gastric Lesions in Rats. Folia Pharmacol. Jpn. 85: 443-446.

Kaneko, K., T. Mitsuma, H. Nagai, K. Kusugami, T. Iyo & S. Mori. 1998. Central Action of Adrenomedullin to Prevent Ethanol-Induced Gastric Injury Through Vagal Pathway in Rats. Am. J. Physiol Regulatory Int. Comp. Physiol. 274: 1783-1788.

Kas, H.S. 1997. Review Chitosan: Properties, Preparation and Application to Microparticulate System. Microencapsulation. 14 (6): 689-711.

Khan, T.A. 2002. Reporting Degree of Deacetylation Values of Chitosan: The Influence of Analytical Methods. J. Pharm. Pharmaceut. Sci. 5(3): 205-212.

Lachman, L., H.A. Lieberman & J.L. Kanig. 1994. Teori dan Praktek Farmasi Industri 2. Edisi ketiga. Diterjemahkan oleh Siti Suyatmi. Universitas Indonesia Press, Jakarta. hal: 643-736.

Laurence, D.R. & A.L. Baqarach. 1964. Evaluation of Drug Activities, Pharmacometrics. Vol. I. Academic Press, London, New York.
 
Li, S.P., C.M. Pendhakar, G.N. Mehta, M.G. Karth & K.M. Feld. 1993. Sucralfate As A Bioadhesive Gastric Intestinal Retention System: Prelimary Evaluation. Drug Dev. Ind. Pharm. 19 (19): 2519-1537.

Manjang, Y. 1993. Ánalisis Ekstrak Berbagai Jenis Kulit Udang terhadap Mutu Kitosan. Jurnal Penelitian Andalas edisi Ilmu Kesehatan dan Pengetahuan Alam.  No. 12: 138-143.

Naciye, Y.B. 2000. Protective Effect of Centrally-Injected Glucagon-Like Peptida-Induced Gastric Mucosal Lesion in Rat. Turkish Journal of       Gastroenterology. 17 (1):1-8. 

Pihan, G., C. Rigello & S. Szabo. 1987. Free Radicals and Lipid Peroxidation in Ethanol and Aspirin-Induced Gastric Mucosal Injury. Dig. Dis. Sci.          32: 1395-1401.

Ravi Kumar, M.N.V. 2000. A Review of Chitin and Chitosan Application. Reactive and Functional Polymers. 46: 1-27.

Sakkinen, M. 2003. Biopharmaceutical Evaluation of Microcrystalline Chitosan as Release-Rate-Controlling Hydrophilic in Granules for Gastro-Retentive Drug Delivery. Academic Dissertation. Department of Pharmacy University of Helsinki, Helsinki.

Snyman, D. 2003. Evaluation of Mucoadhesive Properties of N-Trimethyl Chitosan Chloride. Drug Dev. Ind. Pharm.  29 (1): 61-69.

Srijanto, B.2001. Kajian Peengembangan Teknologi Proses Produksi Kitin dan Kitosan Secara Kimiawi. Pusat Pengkajian dan Penerapan Teknologi Farmasi dan Medika-BPPT, Jakarta.

Voight, R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Edisi kelima. Diterjemahkan oleh Soendani Noerono. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. hal: 157-255.

Wade, A. & P.J. Weller. 1994. Handbook of Pharmaceutical Excipient. Second edition. The Pharmaceutical Press, London.  p: 424-426.

Well, J.L. 1988. Pharmaceutical Preformulation, The Physicochemical Properties of Drug Substance. Halsted Press, New York. p: 209-214.

Wilson, L.M. & L.B. Lester. 1992. Lambung dan Duodenum, in Sylvia, A.P. & L.M. Wilson, Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Edisi keempat. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. hal: 371-386.

Yoshikawa, T., Y. Naito, A. Kishi, T. Kaneko, M. Yasuda, S. Ichikawa, M. Kondo &              S. Takahashi. 1993. Role of Active Oxygen, Lipid Peroxidation, and Antioxidants in the Pathogenesis of Gastric Mucosal Injury Induced by Indomethacin in Rats. Gut. 34: 732-737.

Wattimena, J.R. 1982. L-Hypoprotenemie Experimentale Chez Le Rat, Explotation Pharmacocinetique Du Modele. These Doct´eur D´Etat Es Sciences Pharmacetiques. Faculte De Pharmacie, Universite Monpellier.