PERANAN VITAMIN C PADA AKTIFITAS FAGOSITOSIS MAKROFAG
TERHADAP Candida albicans PADA MUKOSA VAGINA WANITA HAMIL 
SECARA IN-VITRO

Roslaili Rasyid
Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedoktran Universitas Andalas

ABSTRAK
Berbagai penelitian melaporkan Vitamin-C mampu meningkatkan respon imun tubuh . Penelitian terhadap respon fagositosis makrofag terhadap bakteri dan virus juga sudah ada dilaporkan. Akan tetapi belum banyak yang meneliti tentang peranan vitamin-C terhadap  respon fagositosis sel makrofag terhadap jamur terutama blastospora  Candida albicans.  Vitamin C merupakan antioksidan poten yang telah banyak terbukti mempunyai peranan meningkatkan respon imun seluler  baik pada proses perlekatan (adherence), kemotaksis,fagositosis maupun produksi anion superoksida dengan melalui respon proliferatif limfosit,stimulasi proses fagositosis makrofag
Semula penelitian ini bertujuan untuk mengetahui peranan vitamin-C pada aktivitas fagositosis sel makrofag yang diambil dari bilasan vagina wanita .Akan tetapi setelah dilakukan penelitian, ternyata sangat sulit unutuk mendapatkan biakan murni dari sel makrofag murni  yang berasal dari mukosa vagina, sehingga diputuskan untuk mengambil sel makrofag yang terdapat pada cairan peritonium mencit. Setelah diberikan tambahan Vitamin C dengan berbagai dosis yang berbeda secara oral selama 7 hari berturut-turut,kemudian  di ukur daya fagosit nya terhadap blastospora  C. albicans
Penelitian ini merupakan penelitian laboratorium yang bersifat eksperimental murni dan semua variabel yang mempengaruhi dapat dikendalikan. 12 ekor mencit putih betina galur Swiss yang berumur 4 – 6 minggu dengan berat badan lebih kurang 20 gram yang dibagi atas kelompok perlakuan .dan  kelompok kontrol. Perinciannya tiga ekor  mencit sebagai kontrol, tiga mencit diberikan Vitamin C  dosis 0.26 mg ( setara dengan 100 mg dosis manusia), tiga ekor diberikan Vitamin C dosis 0,52 mg (setara dengan 200 mg dosis manusia)  dan 3 ekor lagi diberi Vitamin C  dosis 0,78 mg (setara dengan 300 mg dosis manusia).
Hasil penelitian yang didapat menunjukkan perbedaan yang jelas antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat perlakuan tambahan Vitamin C. Kelompok kontrol terlihat memfagosit lebih sedikit  blastospora dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan tambahan Vitamin C  dosis 0,52 mg dan 1,04 mg. Akan tetapi pada kelompok yang mendapat tambahan dosis Vitamin C 0,26 mg tampak rerata sel makrofag yang menfagosit blastospora lebih rendah dari kelompok kontrol. Hasil analisis statistik dengan One Way Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna ( p < 0.05) antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan tambahan Vitamin C dosis 0,78 mg atau setara dengan Vitamin C dosis 300 mg pada manusia. Hal ini sesuai dengan yang didapatkan oleh Melok dkk (2004) dalam penelitiannya tentang peranan vitamin C dalam peningkatan aktivitas sel monosit pada darah orang sehat mendapatkan konsentrasi Vitamin C terbaik yang dapat meningkatkan aktivitas fagositosis sel mononuklear (monosit) itu adalah pada konsentrasi 200mg/ml.

PENDAHULUAN
Makrofag merupakan fagosit profesional yang penting dalam pertahanan vagina. Dalam fungsinya menfagositosis dan intracelluler killing, makrofag melepaskan berbagai metabolit oksigen,melekat dan menghancurkan target dengan perantaraan limfosit T atau limfosit B untuk menghancurkan virus,bakteri ,jamur dan sel tumor .Untuk membunuh blastospora dan hifa dari jamur Candida albicans ,makrofag menggunakan amat banyak rangkaian mekanisme oksidatif (aerob) dan non oksidatif(anaerob). Berbagai penelitian membuktikan bahwa makrofag memiliki aktivitas kandidisidal lebih besar pada suasana aerob dibandingkan dengan anaerob yang mengindikasikan bahwa makrofag membunuh Candida albicans dengan mekanisme yang terutama melibatkan respiratory burst. Sistim MPO (myeloperoxidase) dan reaktive nitrogen intermediate(RNI),hidrogen peroksida dan reaktive oxygen species (ROS) penting sebagai oxidative killing makrofag.
      Salah satu species Candida yang sering dijumpai sebagai penyebab infeksi pada mukosa vagina adalah Candida albicans. Penyakit Vulvovaginal Candidiasis (VVC)sering terjadi pada wanita usia reproduktif . Sekitar 75% wanita di usia reproduktif pernah menderita VVC semasa hidupnya. VVC diperkirakan dialami lebih dari 10 juta wanita di seluruh dunia setiap tahunnya dan merupakan salah satu masalah terbesar pada bidang Obstetri dan Ginekologi hingga saat ini
.   Jumlah penderita VVC dalam kehamilan biasanya lebih tinggi.Hal ini disebabkan karena peningkatan hormon estrogen yang dapat meningkatkan pertumbuhan Candida albicans.  Gejala VVC meningkat sekitar 10 %  pada wanita dalam kehamilan trimester pertama, dan terus meningkat sampai mencapai 36-55 % pada wanita dalam kehamilan trimester ketiga (Sobel et al., 1998). Pada trimester ketiga peningkatan estrogen mencapai puncaknya yang menyebabkan kelebihan glikogen pada epitel vagina. Estrogen meningkatkan eksposur glycoprotein complexes acting sebagai reseptor perlekatan blastospora,sehingga VVC jarang ditemukan pada keadaan hypoestrogenemia seperti pada premenarche dan postmenopause. Biasanya keluhan berkurang atau hilang setelah bayi lahir. Pada pemeriksaan beberapa hari sampai 6 minggu setelah persalinan ditemukan frekuensi VVC positif hanya sekitar 5,4 % saja (Sobel et al 1998, Fidel et al 1998, Ringdahl 2000) 
     Fuente et al (2000) telah membuktikan bahwa pada pemberian vitamin C  dapat menstimulasi proses fagositosis makrofag,melalui pelepasan sitokin terutama IFN-γ, dengan cara meregulasi sistim imun sehingga terjadi perbaikan respon imun. Melok dkk (2004) dalam penelitiannya tentang peranan vitamin C dalam peningkatan aktivitas sel monosit pada darah orang sehat mendapatkan konsentrasi Vitamin C terbaik yang dapat meningkatkan aktivitas fagositosis sel mononuklear itu adalah pada konsentrasi 200mg/ml.
      Berkaitan dengan latar belakang di atas,dilakukan penelitian secara in vitro dengan menggunakan kultur atau biakan makrofag  yang diambil dari bilasan cairan vagina wanita hamil dan melihat pengaruh aktifitas fagositosisnya terhadap Candida albicans dengan penambahan vitamin C dengan berbagai perbedaan konsentrasi.
 
Rumusan Masalah

	Penyakit Vulvovaginal Candidiasis merupakan suatu infeksi oleh jamur Candida albicans pada vagina .Infeksi ini sering ditemukan pada wanita usia produktif. Prevalensinya meningkat pada kehamilan terutama pada trimester ketiga. Hal ini disebabkan karena terjadinya peningkatan hormon estrogen pada wanita hamil dan menyebabkan peningkatan eksposur glycoprotein complexes acting di mukosa vagina . Glikogen inilah yang berfungsi  sebagai reseptor perlekatan blastospora dari jamur Candida albicans sehingga memudahkan timbulnya infeksi. Imunitas lokal di vagina terutama makrofag tidak sanggup menetralisir peningkatan jumlah ini. Vitamin C merupakan suatu antioksidan yang poten dan diduga dapat meningkatkan aktifitas fagositosis makrofag.
	Berdasarkan latar belakang masalah penelitian, dapat dibuat perumusan masalah sebagai berikut :
•	Adakah pengaruh pemberian Vitamin C terhadap peningkatan aktifitas fagositosis makrofag secara in vitro terhadap Candida albicans  yang diambil dari mukosa vagina wanita hamil yang menderita Vulvovaginal Candidiasis ?
•	Berapakah dosis maksimal Vitamin C yang dibutuhkan untuk dapat mencapai aktifitas fagositosis tertinggi dari makrofag terhadap Candida albicans yang diambil dari  mukosa vagina wanita hamil yang menderita Vulvovaginal Candidiasis.?

Hipotesis penelitian 
 	Pada penelitian ini terdapat 2 (dua) hipotesis, yaitu terdapat peningkatan jumlah makrofag yang menfagositosis Candida albicans dalam kultur makrofag yang diambil dari mukosa vagina wanita hamil setelah penambahan vitamin C dan terdapat peningkatan jumlah Candida albicans yang dalam tiap makrofag yang teraktivasi setelah penambahan vitamin C kedalam kultur makrofag yang diambil dari mukosa vagina wanita hamil. 

Tujuan Penelitian
Untuk mengetahui kemampuan aktifitas fagositosis sel makrofag yang diambil dari mukosa vagina wanita hamil yang menderita Vulvovaginal Candidiasis, terhadap Candida albicans secara in vitro sebelum dan sesudah pemberian vitamin C 

METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan Case Control Study yang bersifat eksperimental murni dan semua variabel yang mempengaruhi dapat dikendalikan. 

Populasi dan sampel
Populasi penelitian adalah seluruh wanita hamil yang didiagnosis menderita Vulvovaginal candidiasis yang bersedia diambil cairan vagina. 
Sampel diambil dengan cara consequtive dari populasi yang ada. 

Alat dan bahan
	Bahan-bahan yang digunakan untuk penelitian ini bilasan (lavage) cairan vagina wanita hamil yang menderita Vulvovaginal Candidiasis,Amonium Chlorida,RPMI 1640,Vitamin C, Suspensi Candida dengan kepadatan 2.5 x 107 sel/ml,Saboraud agar,PBS (Phosphat Buffer Saline) pH 7.2 ,methanol,Giemsa,RPMI Complet medium (campuran RPMI, PBS,Penstrep, Fungizon),Aquadest
	Alat-alat yang digunakan untuk penelitian ini : Mikroskop,laminar air flow,sentrifuge, Incubator CO2 5%,sumuran kultur ,microplate 24, Nun TC Cover slips  174950 Thermanox diameter 13 mm. 
Cara Kerja

Isolasi dan kultur Makrofag
          20ml cairan RPMI dingin ditambahkan ke cairan bilasan vagina,ditunggu 3 – 5 menit, lalu diaspirasi cairan yang ada dengan menggunakan spuit injeksi.Aspirat yang didapat dimasukkan ke dalam tabung sentrifus dan disentrifus pada 1200 rpm, 4◦C, selama 10 menit.Supernatatan dibuang dan tambahkan 3 ml medium RPMI komplit pada pellet yang didapatkan.Jumlah sel yang didapat dihitung dengan menggunakan hemositometer, diresuspensi hingga didapatkan kepadatan 2.5 x 106 sel/ml.Suspensi sel yang didapat dikultur pada sumuran microplate 24 yang telah diberi cover  slips bulat, setiap sumuran 200 μl  (5 x 105 sel/ml). Lalu diinkubasi dalam inkubator CO2 5%, 37◦C selama 30 menit kemudian tambahkan medium RPMI komplit 1 ml/sumuran.Sumuran ditambahkan dengan Vitamin C (konsentrasi 100mg/ml, 150mg/ml, 200mg/ml, 250mg/ml, 300mg/ml ) masing-masing sebanyak 0,5 ml/sumuran.Diinkubasi dilanjutkan hingga 24 jam

Uji Fagositosis Makrofag
Makrofag sekarang yang berada dalam sumuran terdiri atas 2 (dua) kelompok, yaitu yang mendapat Vitamin C dan yang tidak mendapat Vitamin C. Perlakuan lanjutan untuk kedua makrofag tersebut sama. Makrofag yang sudah dikultur dibilas dengan RPMI 2 x. Ditambahkan suspensi candida dalam PBS sebanyak 200 μl dengan kepadatan 2.5 x 107 sel/ml.Lalu diinkubasi dalam inkubator CO2 5 %, 37◦C selama 30 menit.dicuci dengan PBS 3 kali. Dikeringkan pada suhu ruangan dan difiksasi dengan metanol selama 30 detik.Setelah 30 detik methanol dibuang, ditunggu sampai kering. Dicat dengan giemsa 20% selama 30 menit.Dicuci dengan aquadest,dan diangkat dari sumuran dan dikeringkan pada suhu ruangan.Diperiksa dibawah mikroskop dengan perbesaran 400x

Pengumpulan dan analisis data
SPSS 11.0. Evaluasi awal dan akhir menggunakan t test berpasangan dan perbandingan antara kemampuan fagositosis makrofag terhadap Candida albicans sebelum dengan sesudah pemberian vitamin C dilakukan dengan independent t test. 

HASIL DAN  PEMBAHASAN
Pada dasarnya penelitian ini mengalami perubahan yang cukup mendasar mengingat situasi dan kondisi yang sangat tidak memungkinkan. Pada awalnya penelitian menggunakan sel makrofag dari  bilasan vagina, namun setelah dilakukan pengujian ternyata tidak berhasil untuk mendapatkan sel makrofag secara murni . Pada bilasan vagina terdapat sangat banyak kuman-kuman sebagai flora normal yang menetap. Kuman-kuman flora normal ini  sangat berguna untuk mempertahankan keasaman vagina, guna menghambat pertumbuhan bakteri patogen. Pada waktu pembiakan sel makrofag yang diambil dari bilasan cairan vagina , ternyata terdapat pertumbuhan kuman-kuman ini sehingga tidak dapat dihasilkan biakan murni dari sel makrofag vagina.
 Setelah dilakukan sejumlah diskusi yang intensif dengan pembimbing dari FK UGM bagian Tropical Medicine, diketahui bahwa akan sangat banyak faktor yang mempengaruhi kualitas makrofag vagina, sehingga tidak akan didapatkan makrofag yang masih murni. Untuk mendapatkan sel makrofag dari tubuh manusia sebenarnya dapat diambil dari tempat-tempat lain seperti di paru-paru sebagai makrofag alveolar, di hati sebagai sel Kupfer, melapisi sinusoid limpa dan kelenjar limfe, sebagai sel mesangial dalam glomerulus, sel mikroglia di otak dan sel osteoklast dalam tulang. Didalam cairan tubuh banyak dijumpai pada cairan pleura dan cairan peritoneum. Akan tetapi untuk mendapatkan sel makrofag dari tempat-tempat tersebut sangat sulit karena meng invasi tubuh manusia. Berkenaan dengan  pertimbangan tersebut, maka dilakukan pengambilan sel makrofag dari bilasan peritoneal tikus putih galur swiss yang dinilai lebih murni dengan risiko kontaminasi sangat minimal. 
Pada penelitian ini telah dilakukan pemeriksaan pengaruh pemberian Vitamin C terhadap aktifitas sel makrofag peritonium mencit dalam menfagosit  blastospora Candida albicans pada 12 ekor mencit putih betina galur Swiss yang berumur 4 – 6 minggu dengan berat badan lebih kurang 20 gram yang dibagi atas kelompok perlakuan .dan  kelompok kontrol. Perinciannya tiga ekor  mencit sebagai kontrol, tiga mencit diberikan Vitamin C  0.26 mg ( setara dengan 100 mg dosis manusia), tiga ekor diberikan Vitamin C  0,52 mg (setara dengan 200 mg dosis manusia)  dan 3 ekor lagi diberi Vitamin C   0,78 mg (setara dengan 300 mg dosis manusia).
	Sebelum dilakukan analisis data, maka terlebih dahulu dilakukan pengujian distribusi data. Hasil perhitungan menunjukkan distribusi data dalam penelitian ini normal. Baik data tentang jumlah sel yang difagosit oleh makrofag maupun  persentase makrofag yang memfagosit blastospora Candida albicans.

Gambar 6.1. Normalitas data jumlah blastospora yang difagosit oleh tiap sel makrofag

Gambar 6.2. Normalitas data persentase makrofag yang memfagosit blastospora Candida albicans per 100 sel makrofag
.

Jumlah blastospora yang difagosit oleh setiap makrofag
Jumlah blastospora yang  dapat difagosit oleh tiap sel makrofag, dibandingkan antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat tambahan Vitamin C dengan berbagai dosis, dapat dilihat pada tabel 6.1 berikut ini. 

Tabel 6.1. Perbandingan jumlah blastospora yang difagosit oleh tiap sel makrofag dari kelompok kontrol dengan kelompok yang dapat tambahan Vitamin C  peroral

Perlakuan
	N	Rerata	SD	
        Kontrol
Dosis 0,26 mg
Dosis 0,52 mg
Dosis 0,78 mg	9
9
9
9	7,52
6,97
8,70
      10,02	0,73
0,74
0,49
0,78	

Pada tabel 6.1 terlihat bahwa rata-rata jumlah blastospora yang difagosit oleh tiap sel makrofag menunjukkan perbedaan antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat perlakuan tambahan Vitamin C. Kelompok kontrol terlihat memfagosit lebih sedikit  blastospora dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan tambahan dosis Vitamin C  0,52 mg dan 1,04 mg. Akan tetapi pada kelompok yang mendapat tambahan dosis Vitamin C 0,26 mg tampak rerata sel makrofag yang menfagosit blastospora lebih rendah dari kelompok kontrol.  Pada kelompok kontrol, jumlah rata-rata tiap sel makrofag mampu menfagosit 7,52 ± 0,73 blastospora, sedangkan pada mencit kelompok perlakuan yang mendapat dosis Vitamin C  0,26 mg peroral selama 7 hari, sel makrofagnya hanya mampu rata-rata menfagosit 6,97 ± 0,74 blastospora, kelompok perlakuan yang mendapat dosis Vitamin C  0,52 mg , sel makrofagnya juga  hanya mampu rata-rata menfagosit 8,70 ± 0,49 blastospora dan kelompok perlakuan yang mendapat dosis itamin C 0,78 mg ,sel makrofagnya rata-rata menfagosit  jauh lebih sedikit yaitu 10,02 ± 0,78 blastospora. Lebih jelas terlihat pada gambar 6.3 di bawah ini.

Gambar 6.3 : Rerata  blastospora yang difagosit oleh setiap sel makrofag

Hasil analisis statistik dengan One Way Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna ( p < 0.05) antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan tambahan Vitamin C dosis 0,78 mg. Uji lanjutan dengan LSD 50 menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok dosis Vitamin C 0,26 mg dengan dosis  0,78 mg. Secara lengkap dapat dilihat pada tabel analisis Post Hoc dengan LSD 50 terhadap jumlah blastospora yang dapat difagosit oleh sel makrofag  kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan di bawah ini.

Tabel 6.2.  Analisis Post Hoc dengan LSD 50 terhadap seluruh komponen penelitian tentang jumlah blastospora yang difagosit oleh tiap sel makrofag
(I) Kelompok	(J) Kelompok	P	
			
Kontrol	Dosis 0.26 mg	,064	
	Dosis 0,52 mg	,020	
	Dosis 0,78mg	,000	
Dosis 0.26mg	Kontrol	,064	
	Dosis 0,52mg	,000	
	Dosis 0,78mg	,000	
Dosis 0,52 mg	Kontrol	,020	
	Dosis 0.26 mg	,000	
	Dosis 0,78mg	,000	
Dosis 0,78 mg	Kontrol	,000	
	Dosis 0.26mg	,000	
	Dosis 0,52 mg	,000	

Pada tabel di atas dapat ditarik kesimpulan bahwa ;
•	Antara mencit kelompok kontrol dengan  kelompok perlakuan terdapat perbedaan yang signifikan (p < 0,05) , kecuali pada kelompok yang mendapat tambahan vitamin C dosis 0,26mg  atau setara dengan dosis Vitamin C 100mg pada manusia tidak tampak perbedaan.
•	Antara dosis 0,26 mg dengan kontrol tidak ada terdapat perbedaan yang signifikan, sedangkan dengan  dosis 0,26 mg dan dosis 0,78 mg tampak adanya perbedaan peningkatan fagositosis yang signifikan.
•	Antara dosis 0,52 mg dengan kontrol, dosis 0,26 mg dan  dosis 0,78 mg  terdapat perbedaan yang signifikan  (p< 0,05)
•	Antara dosis 0,78 mg dengan kelompok kontrol, kelompok dosis 0,26 mg, kelompok dosis 0,52 mg  terdapat perbedaan yang signifikan ( p<0,05), 

Persentase tiap 100 sel makrofag yang menfagosit blastospora
Persentase tiap 100 sel makrofag yang memfagosit blastospora menunjukkan pola yang hampir sama dengan tabel dan grafik di atas. Jumlah blastospora yang difagosit pada kelompok kontrol rata-rata dari 100 sel makrofag dapat menfagosit blastospora lebih banyak dari kelompok perlakuan yang mendapat tambahan Vitamin C. Secara lengkap dapat dilihat pada tabel 6.3 di bawah ini. 

Tabel 6.3 :  Perbandingan persentase tiap 100 sel makrofag yang menfagosit blastospora dari kelompok kontrol dengan kelompok yang dapat tambahan Vitamin C 

Perlakuan
	N	Rerata	SD	
        Kontrol
Dosis 0,26 mg
Dosis 0,52 mg
Dosis 0,78 mg	9
9
9
9	73,78
75,88
78,89
83,33	9,57
6,33
5,20
6,08	

Pada tabel 6.3 di atas pada kelompok kontrol terdapat rata-rata 73,78 % ± 9,57 sel makrofag yang menfagosit blastospora dengan jumlah yang berbeda tiap selnya. Sedangkan pada kelompok perlakuan yang mendapat Vitamin C  dosis 0,26 mg peroral selama 7 hari rata-rata dari 100 sel makrofag  75,88 % ± 6,33 % yang dapat menfagosit blastospora. Kelompok mencit yang mendapat dosis Vitamin C dosis 0,52mg, rata-rata 78,89 % ± 5,20 % makrofag yang menfagosit blastospora dan kelompok mencit yang mendapat Vitamin C dosis 0,78 mg , rata-ratanya yaitu 83,33 %  ± 6,08 %  makrofag yang mampu menfagosit blastospora .Lebih jelas dapat terlihat  pada gambar 6.4 di bawah ini.  
Gambar 6.4  Rerata persentase dari 100 sel makrofag yang dapat menfagosit blastospora 
Berdasarkan hasil tabel 6.3 dan gambar 6.4 di atas  , terlihat  kenaikan persentase sel makrofag yang dapat memfagosit blastospora karena pemberian Vitamin C. Hasil analisa statistik dengan menggunakan uji One Way Anova memperlihatkan perbedaan yang bermakna secara signifikan (p < 0.05). Analisa lanjutan dengan LSD 50 memperlihatkan bahwa  perbedaan ditemukan antara kelompok kontrol dengan  kelompok perlakuan dosis 0,78 mg dan antara kelompok dosis 0.26 mg dengan kelompok 0,78 mg. Namun tidak ditemukan perbedaan antara kelompok 0,26mg dengan 0,52 mg. Secara lengkap dapat dilihat pada tabel analisis Post Hoc dengan LSD 50 terhadap persentase sel makrofag yang dapat menfagosit blastospora  pada tabel 6.4 di bawah ini

Tabel 6.4.  Analisis  Post Hoc dengan LSD 50 terhadap persentase sel makrofag yang dapat  menfagosit blastospora

 (I) Kelompok	(J) Kelompok	P	
			
Kontrol	Dosis 0.26 mg	,527	
	Dosis 0.52 mg	,131	
	Dosis 0,78mg	,007	
Dosis 0,26 mg	Kontrol	,527	
	Dosis 0,52mg	,370	
	Dosis 0,78 mg	,031	
Dosis 0,52 mg	Kontrol	,131	
	Dosis 0.26mg	,370	
	Dosis 0,78 mg	,187	
Dosis 0,78 mg	Kontrol	,007	
	Dosis 0.26 mg	,031	
	Dosis 0,52 mg	,187	

Pada tabel di atas dapat ditarik kesimpulan bahwa ;
•	Antara mencit kelompok kontrol dengan  kelompok perlakuan hanya terdapat perbedaan yang signifikan (p < 0,05) pada kelompok yang mendapat tambahan vitamin C dosis 0,78 mg  atau setara dengan dosis Vitamin C 300 mg pada manusia.
•	Antara dosis 0,52 mg dengan kontrol , dosis 0,26 mg dan dosis 0,78 mg tidak ada terdapat perbedaan yang signifikan
•	Antara dosis 0,26 mg dengan kontrol dan dosis 0,52 mg tidak terdapat perbedaan yang signifikan, sedangkan dengan dosis 0,78 mg  terdapat perbedaan yang signifikan  (p< 0,05)
•	Antara dosis 0,78 mg dengan kelompok kontrol dan kelompok dosis 0,26 mg  terdapat perbedaan yang signifikan ( p<0,05), sedangkan dengan kelompok dosis 0,52 tidak terdapat perbedaan.

Gambar-gambar berikut  ini menunjukkan perbedaan jumlah blastospora Candida albicans yang mampu difagosit oleh sel makrofag dari mencit kelompok kontrol ( mencit yang tidak mendapat tambahan Vitamin C, dengan kelompok perlakuan ( mencit yang mendapat tambahan Vitamin C dengan perbedaan dosis) .

Gambar  6.5  :  Gambar sel makrofag menfagosit blastospora dari kelompok kontrol

Gambar 6.6   Sel makrofag menfagosit blastospora dari kelompok perlakuan diberi Vitamin C dosis 0,52 mg

Gambar 6.7:Gambar sel makrofag menfagosit blastospora dari kelompok perlakuan diberi Vitamin C dosis 0,78 mg

Pada gambar 6.5 , 6.7 dan  6.8 tampak bahwa pada kelompok makrofag yang mendapat perlakuan dengan tambahan Vitamin C peroral selama 7 hari berturut-turtut rata-rata baik jumlah blastospora yang di fagosit oleh tiap makrofag maupun persentase tiap 100 sel makrofag yang mampu menfagosit blastospora terjadi peningkatan yang nyata bila dibandingkan dengan kontrol. Akan tetapi dari perbedaan dosis Vitamin C  yang diberikan, tidak tampak perbedaan yang nyata secara mikroskopis, hanya  setelah dihitung sampai 100 sel makrofag secara mikroskopis, terdapat perbedaan rata-rata baik dalam jumlah sel yang mampu di fagosit oleh tiap makrofag maupun persentase tiap 100 sel makrofag yang menfagosit blastospora.

PEMBAHASAN

Penelitian ini menggunakan 4 kelompok mencit putih galur Swiss dengan 1 kelompok untuk kontrol, tiga kelompok lainnya diberi perlakuan tambahan Vitamin C secara oral dengan perbedaan konsentrasi yaitu yang setara dengan dosis 100 mg, 200 mg dan 300 mg pada manusia. Setelah 7 hari berturut-turut, maka  masing-masing dipanen makrofag peritoniumnya, untuk diuji kemampuan aktifitasnya terhadap blastospora Candida albicans. Dilakukan pengujian terhadap jumlah blastospora yang mampu difagosit oleh tiap sel makrofag dari kelompok kontrol dengan makrofag dari kelompok mencit yang mendapat tambahan Vitamin C peroral.
 Hasil penelitian yang didapat menunjukkan perbedaan yang jelas antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat perlakuan tambahan Vitamin C. Kelompok kontrol terlihat memfagosit lebih sedikit  blastospora dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan tambahan dosis Vitamin C  0,52 mg dan 1,04 mg. Akan tetapi pada kelompok yang mendapat tambahan dosis Vitamin C 0,26 mg tampak rerata sel makrofag yang menfagosit blastospora lebih rendah dari kelompok kontrol. Hasil analisis statistik dengan One Way Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna ( p < 0.05) antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan tambahan Vitamin C dosis 0,78 mg. Uji lanjutan dengan LSD 50 menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok dosis Vitamin C 0,26 mg dengan dosis  0,78 mg. Pada penelitian Hans  (2004) telah diketahui bahwa vitamin C mempunyai efek imunoregulasi dan efek antiviral sehingga mengurangi gejala virus influenza dan juga dapat menghambat patomekanisme penyakit. Pemberian vitamin C dapat menyebabkan peningkatan respon imun melalui peningkatan produksi sitokin dan aktifitas fagositosis. 
     Antara mencit kelompok kontrol dengan  kelompok perlakuan terdapat perbedaan yang signifikan (p < 0,05) , kecuali pada kelompok yang mendapat tambahan vitamin C dosis 0,26mg  atau setara dengan dosis Vitamin C 100mg pada manusia tidak tampak perbedaan. Antara dosis 0,26 mg dengan kontrol tidak ada terdapat perbedaan yang signifikan, sedangkan dengan  dosis 0,26 mg dan dosis 0,78 mg tampak adanya perbedaan peningkatan fagositosis yang signifikan.Antara dosis 0,52 mg dengan kontrol, dosis 0,26 mg dan  dosis 0,78 mg  terdapat perbedaan yang signifikan  (p< 0,05). Antara dosis 0,78 mg dengan kelompok kontrol, kelompok dosis 0,26 mg, kelompok dosis 0,52 mg  terdapat perbedaan yang signifikan ( p<0,05). Fuente et al (2000) telah membuktikan bahwa pada pemberian vitamin C  dapat menstimulasi proses fagositosis makrofag, melalui pelepasan sitokin terutama IFN-γ, dengan cara meregulasi sistim imun sehingga terjadi perbaikan respon imun. 
Persentase tiap 100 sel makrofag yang memfagosit blastospora menunjukkan pola yang hampir sama dengan tabel dan grafik di atas. Jumlah blastospora yang difagosit pada kelompok kontrol rata-rata dari 100 sel makrofag dapat menfagosit blastospora lebih banyak dari kelompok perlakuan yang mendapat tambahan Vitamin C. Hasil analisis statistik dengan One Way Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna ( p < 0.05) antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan tambahan Vitamin C dosis 0,78 mg. Uji lanjutan dengan LSD 50 menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok dosis Vitamin C 0,26 mg dengan dosis  0,78 mg. 
Antara mencit kelompok kontrol dengan  kelompok perlakuan hanya terdapat perbedaan yang signifikan (p < 0,05) pada kelompok yang mendapat tambahan vitamin C dosis 0,78 mg  atau setara dengan dosis Vitamin C 300 mg pada manusia. Antara dosis 0,52 mg dengan kontrol , dosis 0,26 mg dan dosis 0,78 mg tidak ada terdapat perbedaan yang signifikan Antara dosis 0,26 mg dengan kontrol dan dosis 0,52 mg tidak terdapat perbedaan yang signifikan, sedangkan dengan dosis 0,78 mg  terdapat perbedaan yang signifikan  (p< 0,05). Antara dosis 0,78 mg dengan kelompok kontrol dan kelompok dosis 0,26 mg  terdapat perbedaan yang signifikan ( p<0,05), sedangkan dengan kelompok dosis 0,52 mg tidak terdapat perbedaan. Melok dkk (2004) dalam penelitiannya tentang peranan vitamin C dalam peningkatan aktivitas sel monosit pada darah orang sehat mendapatkan konsentrasi Vitamin C terbaik yang dapat meningkatkan aktivitas fagositosis sel mononuklear (monosit) itu adalah pada konsentrasi 200mg/ml 

Kesimpulan 
1.	Pemberian Vitamin C  dapat meningkatkan aktifitas sel makrofag  dalam menfagosit blastospora Candida albicans.
2.	Terdapat perbedaan yang bermakna dalam persentase tiap 100 sel makrofag yang menfagosit blastospora Candida albicans antara kelompok kontrol dengan kelompok yang diberi Vitamin C dosis tinggi 
Saran : 
1.  Dianjurkan untuk melakukan penelitian lebih lanjut mengenai enzim-enzim yang berpengaruh dalam rangkaian mekanisme oksidatif dalam sel makrofag, terutama dalam pembentukan bahan radikal oksidatif yang sampai saat ini masih diyakini sebagai mekanisme eliminasi makrofag yang efektif untuk jamur terutama Candida albicans. 
2. Dalam penggunaan sebagai suplemen, Vitamin C  dianjurkan untuk dikonsumsi dalam rangka meningkatkan aktifitas sel makrofagnya terutama bagi wanita hamil yang sering menderita Vulvovaginal Candidiasis sewaktu hamil, yang mana hal ini disebut akibat peningkatan hormon estrogen.

DAFTAR PUSTAKA
Arici A , Levent M, 1999. Regulation of Monocyte Chemotactic Protein-1 expression in Human endometrial stromal cell by Estrogen and progesteron. Biology of Reproduction 61,85-90.
Ashman, Robert ,1995. Production and function of cytokines in natural and acquired immunity to Candida albicans Infection. Microbiological Review ,4,646-672
Brown, A. J. P., Gow, N. A. R. ,1999 : Regulatory networks controlling Candida albicans morphogenesis Trends Microbiol 7,333-338[Medline]
Calderone RA,CihlarRL, 2002 : Fungal Pathogenesis Principles and Clinical Application. Marcel Deccer Inc. New York. 
Chaffin WL, Lopez-Ribot JL, Casanova M, et al,1998.  Cell Wall and Secreted Proteins of Candida albicans: identification, function, and expression. Microbiol and Mol Biol Rev, 62: 130-80. 
Catherine M, 2001. Individualized hormone replacement therapy. New England Journal Med 345;17
Fidel PL, Sobel JD,1996.  Immunopathogenesis of reccurent vulvovaginal candidiasis. Clin Microbiol Rev; 8: 335-48. 
Joan E, 2001. Postmenopausal Hormone Replacement Therapy, New England Journal Medicine ,vol  345 No 1

Gil Mor ; 2003 . Interaction of Receptors with the Fas Ligand Promoter in Human  Monocytes; The American Assosiation of Immunologist.

Giorgio Santoni,2002 . Immune cell-mediated protection against Vaginal Candidiasis : Am Society for Microbiology, 9th ;4791-4797
Klenner FR. Vitamin C as a Fundamental Medicine, 2005
Melok Tin H, 2005. Peranan Vitamin C dalam meningkatkan aktifitas sel monosit . Berkala Ilmu Kedokteran Vol 37 No 2.
Vazquez-Torres A, Balish E. , 1997 .Macrophage in resistance to candidiasis. Microbiol and Mol Biol Rev,; 61: 170-92 
Wozniak,KL ,2002 : Candida specific antibodies during experimental Vaginal Candidiasis  Infect Immun ,:70;5790-5799